S100A14-siRNA对乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7 TaxR凋亡和耐药的影响

发布时间：2018-11-22 10:26

【摘要】：目的:应用人工合成S100A14-siRNA干扰乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7Tax R细胞内S100A14基因的表达,同时联合紫杉醇培养,观察S100A14-siRNA对乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7 Tax R凋亡和耐药的影响,为乳腺癌新辅助化疗中紫杉醇耐药的基因治疗提供新思路。方法:体外培养普通乳腺癌细胞株MCF-7和乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7 Tax R,并将两种细胞株分别分为三组:(1)空白对照组(DMSO);(2)阴性对照组(Scramble-siRNA);(3)实验组(S100A14-siRNA)。1.应用western blot检测正常乳腺细胞株MCF-10、普通乳腺癌细胞株MCF-7和乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7 Tax R细胞内S100A14的蛋白表达情况。2.人工合成S100A14-siRNA,瞬时转染MCF-7、MCF-7 Tax R细胞,应用western blot检测转染S100A14-siRNA对细胞内S100A14蛋白表达水平的影响。3.转染siRNA后,联合应用不同浓度的紫杉醇培养MCF-7 Tax R 48 h,应用MTT法检测转染后细胞对紫杉醇的敏感性变化情况。4.应用倒置相差显微镜、Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测MCF-7 Tax R转染siRNA后,联合紫杉醇培养对细胞凋亡的影响。5.应用western blot检测MCF-7 Tax R转染siRNA后,联合紫杉醇培养对细胞中线粒体凋亡通路相关蛋白的影响。结果:1.Western blot检测结果显示,乳腺癌紫杉醇耐药细胞株MCF-7 Tax R中S100A14蛋白表达量明显高于紫杉醇敏感细胞MCF-7和乳腺正常细胞MCF-10,组间两两比较差异具有统计学意义(P0.05)。2.Western blot检测结果显示,转染siRNA 48 h后,MCF-7和MCF-7Tax R的实验组细胞内S100A14的蛋白表达量与空白对照组和阴性对照组相比明显减少,且差异具有统计学意义(P0.01)。3.MCF-7 Tax R转染siRNA后,联合不同浓度的紫杉醇培养48 h,MTT检测结果显示,MCF-7 Tax R的阴性对照组和实验组的细胞存活率随紫杉醇浓度的升高均有下降的趋势,但同一浓度下实验组的细胞存活率明显低于阴性对照组,且差异具有统计学意义(P0.05)。4.MCF-7 Tax R转染siRNA后,联合紫杉醇培养48 h,倒置相差显微镜观察显示,实验组细胞大量死亡;Hoechst 33342荧光染色显示,实验组细胞核仅剩少量高度凝集缩小、呈亮蓝色染色的核碎片;流式细胞术检测结果显示,MCF-7 Tax R空白对照组、阴性对照组、实验组的细胞早期凋亡率分别为(9.11±2.01)%、(11.45±1.09)%、(13.14±1.87)%,晚期凋亡率分别为(8.01±1.63)%、(7.54±0.99)%、(72.12±2.47)%,总凋亡率分别为(17.12±3.67)%、(18.99±2.29)%、(85.26±5.01)%,实验组细胞的早期、晚期、总凋亡率均明显高于两对照组,且差异具有统计学意义(P0.05)。5.MCF-7 Tax R转染siRNA后,联合紫杉醇培养48 h,western blot检测结果显示,与两对照组相比,实验组细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达量下调,Bid、Bax、活化caspase-9、活化caspase-7和活化PARP蛋白表达量上调,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.S100A14的高表达与乳腺癌紫杉醇耐药相关。2.S100A14-siRNA可有效转染乳腺癌紫杉醇耐药细胞MCF-7 Tax R并沉默S100A14的蛋白表达。3.沉默S100A14可提高MCF-7 Tax R细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,逆转紫杉醇耐药。4.沉默S100A14并联合紫杉醇培养可通过线粒体凋亡通路诱导MCF-7 Tax R细胞发生凋亡。
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【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】