【摘要】：【目的】探讨TGF-β1调控的mi RNA在三阴性乳腺癌(TNBC)恶性演进中的生物学功能和分子机制,为TNBC的临床诊断、治疗和预后评估提供新的生物标志物和新的分子治疗靶点。【方法】第一部分:1、应用实时荧光定量PCR检测MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中microRNA基因芯片筛选的五种TGF-β1调控的miRNA表达量。2、利用外源性TGF-β1细胞因子刺激五种不同侵袭性的乳腺癌细胞株,检测miR-196a-3p的表达水平与各细胞株侵袭性的相关性。3、应用Transwell实验检测过表达miR-196a-3p的MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的改变。4、应用MTT实验检测过表达miR-196a-3p的MDA-MB-231细胞增殖水平的改变。第二部分:1、应用实时荧光定量PCR筛选出外源性TGF-β1细胞因子刺激下表达水平升高的miR-196a-3p候选靶基因。2、应用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测转染miR-196a-3p模拟物后,MDA-MB-231细胞中候选靶基因ZNF280B与NRP2 mRNA和蛋白水平的表达改变。3、应用实时荧光定量PCR检测转染不同浓度梯度的miR-196a-3p模拟物后,MDA-MB-231细胞中候选靶基因NRP2的表达水平变化。4、应用荧光素酶双报告基因系统验证miR-196a-3p对NRP2的3’-UTR是否具有抑制调控作用。第三部分:1、应用实时荧光定量PCR检测NRP2 siRNA对MDA-MB-231细胞中NRP2表达水平的抑制效率。2、应用Transwell实验检测低表达NRP2的MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的改变。3、应用MTT实验检测低表达NRP2的MDA-MB-231细胞增殖水平的改变。第四部分:1、构建裸鼠移植瘤模型,检测miR-196a-3p对TNBC移植瘤生长的影响。2、构建TNBC肺转移模型,检测miR-196a-3p对TNBC肺转移的影响。3、应用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织与正常乳腺组织中mi R-196a-3p表达水平的差异。4、应用实时荧光定量PCR检测不同分子亚型的乳腺癌中miR-196a-3p表达水平的差异。【结果】第一部分:1、miR-196a-3p在MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞之间差异性表达最明显。2、随着乳腺癌细胞株侵袭性逐渐增强,miR-196a-3p的表达水平逐渐下降。在侵袭性最强的MDA-MB-231细胞中,其表达水平最低。3、高表达的miR-196a-3p能够抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。4、高表达的miR-196a-3p对MDA-MB-231细胞的增殖能力没有影响。第二部分:1、在外源性TGF-β1细胞因子刺激下,MDA-MB-231细胞中ZNF280B和NRP2的表达水平升高。2、在MDA-MB-231细胞中,只有NRP2 mRNA和蛋白表达水平与高表达的miR-196a-3p呈负相关。3、随着MDA-MB-231细胞中miR-196a-3p模拟物转染浓度的升高,候选靶基因NRP2的表达水平逐渐下降。4、miR-196a-3p能够与靶基因NRP2的3’-UTR特异性位点互补配对结合,从而发挥对NRP2的抑制调控作用。第三部分:1、NRP2 siRNA显著抑制MDA-MB-231细胞中NRP2的表达水平。2、NRP2 siRNA能够抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。3、NRP2siRNA对MDA-MB-231细胞的增殖能力没有影响。第四部分:1、miR-196a-3p对TNBC移植瘤的生长没有影响。2、miR-196a-3p显著抑制TNBC肺转移进程。3、乳腺癌组织中miR-196a-3p呈低表达状态。4、miR-196a-3p在基底样型乳腺癌中表达最低。【结论】在TNBC发展过程中,肿瘤微环境的TGF-β1浓度升高,抑制了下游miR-196a-3p的表达,促使miRNA对癌基因NRP2的调控抑制作用消失,靶基因NRP2表达水平得以上升,肿瘤细胞获得更强的侵袭和转移能力,从而加速了TNBC的肺转移进程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 ;日本科学家发现抑制乳腺癌转移的蛋白质[J];中国新药杂志;2009年04期
2 高峰;;预知乳腺癌转移的新研究[J];医学与哲学(临床决策论坛版);2009年06期
3 ;基因影响乳腺癌转移被查明[J];中华中医药学刊;2010年07期
4 高凤霞;;乳腺癌转移的相关因素研究进展综述[J];医学信息(中旬刊);2011年01期
5 宝鲁日;师永红;;乳腺癌转移相关基因的研究进展[J];内蒙古医学院学报;2011年04期
6 ;药物抑制乳腺癌转移[J];中国肿瘤;1996年06期
7 徐杨荣;梁庆模;;乳腺癌转移基因的研究进展[J];医学综述;2007年02期
8 罗万春;易东;刘恩;龚利红;;整数非线性规划模型在乳腺癌转移相关基因表达调控网络建立中的应用[J];北京生物医学工程;2008年02期
9 王福玉;;血清TPS水平预测乳腺癌转移或术后复发的临床观察[J];医学信息;2010年07期
10 彭远远;王捷;;乳腺癌转移小鼠模型的建立与评价[J];现代肿瘤医学;2011年04期
相关会议论文 前10条
1 孙宝存;;乳腺癌转移机制的研究现状与进展[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
2 王培林;黄信孚;谢玉泉;;人乳腺癌转移抑制的初步实验研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
3 刘胜;刘玲琳;;对“从化”理论的认识及其在乳腺癌转移治疗中的应用[A];第十一届全国中医及中西医结合乳腺病学术会议论文集[C];2009年
4 邹天宁;汤学良;聂建云;张季;杨庄青;;肿瘤标志物CA15-3对乳腺癌转移诊断价值的探讨[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
5 乔宇峰;冯玉梅;李晓青;李希;;KNSL4基因单核苷酸多态性与乳腺癌转移的关系[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
6 郭倩倩;;Rankl-Rank信号与乳腺癌转移的关系研究进展[A];第十二次全国中医、中西医结合乳房病学术会议论文集[C];2011年
7 黄佳yN;李红丽;冯涛;;骨形成蛋白BMP4在乳腺癌转移中的作用和机制探讨[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
8 冯玉梅;孙保存;李晓青;牛昀;宁连胜;方志沂;肖春花;王玉丽;张丽娜;李希;郝希山;;利用高通量基因芯片筛选乳腺癌转移预测基因群并用于乳腺癌转移预后分子分型[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议教育集[C];2006年
9 杨清玲;陈昌杰;杨志锋;;vMIP-Ⅱ N端重组肽的原核表达、纯化及活性鉴定[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会论文集[C];2010年
10 胡蕴慧;李双静;Ernesto Yag，
本文编号：2362896
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/2362896.html
