抑制自噬对促进非小细胞肺癌细胞中异鼠李素（ISO）诱导的线粒体依赖的凋亡的研究

发布时间：2018-12-08 11:58

【摘要】：目的：研究异鼠李素对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长的抑制作用及相关分子机制。方法：用异鼠李素处理非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549,通过MTT和单克隆形成实验研究细胞生长和增殖。肺癌细胞的凋亡可通过annexin V FITC/PI流失细胞仪检测。线粒体膜电位可通过JC-1试验检测。EGFP-LC3易位和MDC染色用来评估细胞自噬的发生。结果：用异鼠李素处理非小细胞肺癌(NSCLC)细胞能显著抑制细胞增殖和克隆的形成,异鼠李素处理也能诱导A549细胞中凋亡细胞死亡数目在时间和剂量依赖的方式下显著增加。更进一步的研究表明：发现通过线粒体依赖途径的细胞凋亡过程是通过改变线粒体膜跨膜电位,释放细胞色素C和激活半胱天冬酶来进行的,值得注意的是,用异鼠李素处理A549细胞时诱导自噬体形成和LC3-II蛋白的表达。更有甚者,与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和羟基氯喹(CQ)共处理能显著抑制异鼠李素诱导的自噬,并且在体内和体外都能显著增加异鼠李素诱导的凋亡细胞中死细胞的数目。结论：本课题的研究结果表明：异鼠李素是一个潜在的抗肺癌药物,另外,研究结果揭示出：抑制自噬也许是提高异鼠李素对非小细胞肺癌(NSCLC)化学疗效一个行之有效的策略!
[Abstract]:Aim: to study the inhibitory effect of isorhamnetin on the growth of (NSCLC) cells in non small cell lung cancer (NSCLC) and its molecular mechanism. Methods: Non-small cell lung cancer cell line A549 was treated with isorhamnetin. The growth and proliferation of A549 cells were studied by MTT and Monoclonal formation. Apoptosis of lung cancer cells can be detected by annexin V FITC/PI loss cell analyzer. Mitochondrial membrane potential can be detected by JC-1 assay. EGFP-LC3 translocation and MDC staining are used to evaluate autophagy. Results: treatment with isorhamnetin could significantly inhibit cell proliferation and clone formation in (NSCLC) cells of non-small cell lung cancer, and isorhamnetin treatment could significantly increase the number of apoptotic cells in A549 cells in a time-and dose-dependent manner. Further studies have shown that the process of cell apoptosis through mitochondrial dependent pathway is carried out by changing mitochondrial membrane transmembrane potential, releasing cytochrome C and activating cysteinase. Autophagy formation and LC3-II protein expression were induced in A549 cells treated with isorhamnetin. Moreover, co-treatment with autophagy inhibitor 3-methyladenine (3-MA) and hydroxychloroquine (CQ) significantly inhibited isorhamne-induced autophagy. Both in vivo and in vitro, the number of dead cells in isorhamne-induced apoptotic cells was significantly increased. Conclusion: the results of this study indicate that isorhamnetin is a potential anti-lung cancer drug, in addition, The results suggest that inhibition of autophagy may be an effective strategy to improve the chemical effect of isorhamnetin on (NSCLC) in non-small cell lung cancer (NSCLC).
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2

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本文编号：2368308