以Has-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体建立稳定感染A549细胞株

发布时间：2018-12-15 19:46

【摘要】：目的用Has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒来建立稳定感染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为进一步研究miR-100在NSCLC细胞中的机制奠定基础。方法用has-miR-100-3p抑制剂的重组慢病毒液,以其最适浓度感染A549细胞,获得稳定感染慢病毒的A549细胞株。荧光显微镜观察细胞感染效率,实时定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测稳定感染慢病毒的A549细胞株中miR-100的表达量和细胞株中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果荧光显微镜下可见绿色荧光在细胞中表达。qRT-PCR检测结果显示,感染抑制剂的A549细胞中miR-100的表达量显著减少;流式细胞术检测感染组细胞中均有GFP的表达。结论获得了has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒稳定感染的A549细胞株,该细胞株中内源性miR-100的表达下调。
[Abstract]:Objective to establish a stable (NSCLC) A549 cell line infected with human non-small cell lung cancer (NSCLC) by lentivirus with Has-miR-100-3p inhibitor, and to lay a foundation for further study of the mechanism of miR-100 in NSCLC cells. Methods A549 cells were infected with the recombinant lentivirus solution of has-miR-100-3p inhibitor and the stable lentivirus-infected A549 cell line was obtained. The efficiency of cell infection was observed by fluorescence microscope. Real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) and flow cytometry (FCM) were used to detect the expression of miR-100 in stable lentivirus A549 cell line and the expression of green fluorescent protein (GFP) in the cell line. Results the expression of green fluorescence was observed in A549 cells under fluorescence microscope. The results of qRT-PCR assay showed that the expression of miR-100 was significantly decreased in A549 cells with infection inhibitor, and the expression of GFP was detected by flow cytometry. Conclusion Lentivirus stable infected A549 cell line with has-miR-100-3p inhibitor was obtained, and the expression of endogenous miR-100 was down-regulated in this cell line.
【作者单位】： 安徽医科大学基础医学院;
【基金】：国家自然科学基金(编号:81572749)
【分类号】：R734.2

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本文编号：2381191