天麻素和黄芩素作为佐剂对抗原提呈细胞及黑色素瘤小鼠CTL的作用研究

发布时间：2021-03-24 18:56

  目的肿瘤一直威胁着人类健康,由于其发病率和致死率较高,因此加深对肿瘤的发生机制和免疫学的研究有利于开发出有效的治疗手段。通过注射疫苗来提高机体免疫力是预防疾病的手段之一,但传统疫苗免疫原性弱,相对较难引起免疫反应。天麻和黄芩是两种中药材,其有效成分天麻素和黄芩素有多种药理作用,并且在《本草纲目》中有天麻素无毒的记载。但其是否可以作为免疫佐剂来增强免疫原性还未见报道,所以,我们主要通过天麻素的体内和体外实验来研究天麻素是否具有增强免疫原性的作用;并将黄芩素作为佐剂来评价黄芩素对抗原提呈细胞的免疫增强作用。从实验室的角度为促进临床肿瘤免疫治疗的发展和进步提供一条可行的思路。方法在体外,检测天麻素和黄芩素素对DC2.4和RAW264.7细胞的刺激活性,在体内,检测天麻素和黄芩素对抗原提呈细胞的免疫增强活性,并建立小鼠黑色素瘤模型,检测天麻素作为佐剂对荷瘤小鼠CTL的作用。在体外实验中,我们将LPS作为阳性对照,不同浓度的天麻素和黄芩素分别刺激DC2.4细胞系和RAW264.7细胞系,培养48h后用抗体进行染色,用流式细胞仪检测两种细胞表面蛋白CD80,CD86,MHC I和MHC II的表达量变化;在体内实验中,我们分别做了天麻素作为佐剂对黑色素瘤小鼠CTL的作用研究和黄芩素作为佐剂对抗原提呈细胞的作用研究,在天麻素作为佐剂的研究中,我们将C57BL/6小鼠分为6组,每组10只,以弗式完全佐剂与灭活的B16F10肿瘤细胞作为阳性对照,以灭活的B16F10肿瘤细胞为阴性对照,以天麻素与灭活的肿瘤细胞作为实验组对C57BL/6小鼠进行免疫,免疫3d后对其天然免疫效果进行评价,并建立小鼠黑色素瘤模型,对T细胞的杀伤功能进行评价,最后,综合小鼠的肿瘤大小及存活率来评价天麻素作为佐剂的效果;在黄芩素作为佐剂的研究中,我们将C57BL/6小鼠分为8组,每组10只,以黄芩素与灭活的肿瘤细胞作为实验组对C57BL/6小鼠进行免疫,免疫3d后对小鼠脾脏细胞中的抗原提呈细胞表面蛋白及分泌的细胞因子进行检测,综合体外结果,评价黄芩素对抗原提呈细胞的激活作用。结果体外流式检测结果显示,天麻素和黄芩素有较强的抗原提呈细胞激活作用;体内结果显示,天麻素和黄芩素对抗原提呈细胞表面标志物和胞内细胞因子的表达有增强作用,并且天麻素能激活CD4+T细胞,并使其高表达细胞因子IL-2和IFN-γ,激活CD8+T细胞,使其高表达细胞因子perforin,TNFa和IFN-γ。结论天麻素能够提高T细胞介导的免疫应答,并显著提高了荷瘤小鼠的存活时间;天麻素因其在体外和体内都有较强的免疫激活作用,具有作为肿瘤疫苗佐剂的潜质;黄芩素作为佐剂对抗原提呈细胞有较强的免疫增强作用。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R730.51

【参考文献】

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本文编号：2402336