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miR-205慢病毒表达载体的构建及其对乳腺癌细胞作用的初步研究

发布时间:2019-01-08 17:03
【摘要】:目的构建micoRNA-205(miR-205)慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞MB231,建立稳定表达miR-205的MB231细胞株,观察其增殖能力的变化。方法酶切慢病毒载体GV369,设计并合成miR-205引物,通过PCR扩增目的基因连接到慢病毒载体上。对重组质粒双酶切鉴定,进行慢病毒hsa-miR-205的包装和滴度测定。用构建好的慢病毒感染MB231细胞,定量PCR检测细胞中miR-205表达水平的变化,MTT和划痕实验观察过表达miR-205后MB231细胞增殖和迁移能力的变化。结果测序显示,目的基因连接慢病毒载体成功。慢病毒稳定感染了MB231,定量PCR结果显示,感染hsa-miR-205的MB231中miR-205表达明显提高,MTT和划痕实验结果显示感染后MB231的细胞增殖和迁移能力受到抑制。结论成功构建了miR-205慢病毒表达载体,并建立了稳定表达miR-205的细胞株MB231,显示其可能负调控乳腺癌细胞的恶性生物学行为,为后期进一步研究miR-205的功能和机制奠定了基础。
[Abstract]:Objective to construct micoRNA-205 (miR-205) lentivirus expression vector, and to establish a stable MB231 cell line expressing miR-205 stably in breast cancer cell MB231, and to observe the change of its proliferative ability. Methods miR-205 primers were designed and synthesized by enzyme digested lentivirus vector GV369,. The target gene was ligated to lentivirus vector by PCR amplification. The recombinant plasmid was digested with double enzyme, and the packaging and titer determination of lentivirus hsa-miR-205 were carried out. MB231 cells were infected with constructed lentivirus and the changes of miR-205 expression were detected by quantitative PCR. The proliferation and migration of MB231 cells after miR-205 expression were observed by MTT and scratch assay. Results sequencing showed that the target gene was successfully linked to lentivirus vector. Stable infection of lentivirus with MB231, quantitative PCR results showed that the expression of miR-205 in MB231 infected with hsa-miR-205 was significantly increased, and MTT and scratch test showed that the proliferation and migration of MB231 cells were inhibited after infection. Conclusion the expression vector of miR-205 lentivirus was successfully constructed, and the cell line MB231, expressing miR-205 stably showed that it might negatively regulate the malignant biological behavior of breast cancer cells. It lays a foundation for further study on the function and mechanism of miR-205.
【作者单位】: 安徽医科大学基础医学院;皖西卫生职业学院;
【基金】:国家自然科学基金(编号:81302319) 安徽省自然科学基金(编号:1308085MH121) 国家级大学生创新创业训练计划项目(编号:201510366013)
【分类号】:R737.9

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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