腺病毒介导表达NM23基因的人胃癌细胞株BGC-823的建立

发布时间：2019-01-26 14:32

【摘要】：目的:本实验通过构建携带有NM23基因的重组腺病毒载体并加以鉴定,包装腺病毒并感染人胃癌细胞株BGC-823,观察其对人胃癌细胞株BGC-823细胞凋亡的影响,从而建立表达NM23基因的人胃癌细胞株BGC-823。方法:(1)以质粒NM23-PIRES2-EGFP为模版,采用PCR法扩增出NM23基因,克隆至腺病毒载体p CMV-MCS-IRES-EGFP上,形成重组腺病毒载体p CMV-NM23-IRES-EGFP并酶切鉴定及基因测序;(2)包装病毒并检测其滴度,确定腺病毒感染人胃癌细胞株BGC-823的最佳MOI值。(3)将人胃癌细胞株BGC-823分为实验组(NM23-OE组,感染p CMV-NM23-IRES-EGFP)、空白组(Ctrl组),阴性对照组(NC组,感染p CMV-MCS-IRES-EGFP);(4)分别用Real Time PCR和Western Blot检测3组细胞中NM23基因m RNA和蛋白表达;(5)通过流式细胞仪检测3组胃癌细胞株BGC-823的凋亡率。结果:(1)经酶切鉴定和基因测序证实成功构建重组腺病毒p CMV-NM23-IRES-EGFP;(2)经扩增后,重组腺病毒的滴度为4.0x1010ifu/m L;(3)Real Time PCR和Western Blot结果显示:阴性对照组与空白组相比差异无统计学意义(P0.05),而实验组的NM23的m RNA和蛋白表达显著高于其他两组(P0.05);(4)实验组BGC-823细胞的凋亡率也显著高于其他两组(P0.05)。结论:(1)成功构建了过表达NM23基因的重组腺病毒p CMV-NM23-IRES-EGFP载体;(2)成功构建了腺病毒介导的表达NM23基因的人胃癌细胞株BGC-823;(3)通过上调NM23基因的表达,可观察到胃癌细胞株BGC-823的凋亡水平有明显升高。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of adenovirus vector carrying NM23 gene on apoptosis of human gastric cancer cell line BGC-823 by packaging adenovirus and infecting human gastric cancer cell line BGC-823,. Thus, a human gastric cancer cell line BGC-823. expressing NM23 gene was established. Methods: (1) using plasmid NM23-PIRES2-EGFP as template, NM23 gene was amplified by PCR and cloned into adenovirus vector p CMV-MCS-IRES-EGFP to form recombinant adenovirus vector p CMV-NM23-IRES-EGFP. (2) package the virus and detect its titer, and determine the best MOI value of adenovirus infected human gastric cancer cell line BGC-823. (3) the BGC-823 of human gastric cancer cell line was divided into experimental group (NM23-OE group, infected with p CMV-NM23-IRES-EGFP). Blank group (Ctrl group), negative control group (NC group, infected with p CMV-MCS-IRES-EGFP); (4) the expression of m RNA and protein of NM23 gene was detected by Real Time PCR and Western Blot, and the apoptosis rate of BGC-823 was detected by flow cytometry. Results: (1) after amplification of recombinant adenovirus p CMV-NM23-IRES-EGFP; (2), the titer of recombinant adenovirus was confirmed to be 4.0x1010ifu/m L by restriction enzyme digestion and gene sequencing. (3) the results of) Real Time PCR and Western Blot showed that there was no significant difference between the negative control group and the blank group (P0.05), while the expression of m RNA and protein of NM23 in the experimental group was significantly higher than that in the other two groups (P0.05). (4) the apoptosis rate of BGC-823 cells in the experimental group was significantly higher than that in the other two groups (P0.05). Conclusion: (1) the recombinant adenovirus p CMV-NM23-IRES-EGFP vector expressing NM23 gene was successfully constructed; (2) the adenovirus mediated expression of NM23 gene in human gastric cancer cell line BGC-823; was successfully constructed. (3) by upregulating the expression of NM23 gene, the apoptotic level of gastric cancer cell line BGC-823 was significantly increased.
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈进宏;蔡端;马保金;;肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体通过促进死亡相关蛋白3表达抑制人胃癌细胞株的生长[J];外科理论与实践;2006年05期

2 王少卿,王绪;奥曲肽对人胃癌细胞株抑制作用机制的实验研究[J];徐州医学院学报;2002年04期

3 马锐,何红梅,袁媛;大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823生长的影响[J];肿瘤防治杂志;2005年04期

4 陈进宏,马保金,蔡端;重组人肿瘤坏死因子-α和5-氟尿嘧啶通过诱导死亡相关蛋白3表达抑制人胃癌细胞株的生长[J];上海医学;2005年02期

5 姜炅;董蕾;秦斌;郭晓燕;王新阳;李红;;散癖平胃方剂对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响[J];西安交通大学学报(医学版);2013年05期

6 刘红英,张t ;尼美舒利对丝裂霉素-c抑制人胃癌细胞株细胞增殖及诱导凋亡影响的实验研究[J];中国内镜杂志;2004年07期

7 张俊文,王丕龙,杨致邦;运用产气袋法制造微缺氧培养人胃癌细胞株SGC-7901[J];中国病理生理杂志;2005年08期

8 汤睿;朱正纲;瞿颖;李建芳;纪玉宝;刘炳亚;燕敏;林言箴;;温热体外对人胃癌细胞株生物学行为的影响[J];世界华人消化杂志;2006年02期

9 张承玉;富泽龙;郑学芝;刘晓霓;;芦荟大黄素抑制人胃癌细胞株SGC-7901增殖研究[J];中国药师;2008年12期

10 马嵋;张燕;张玲;魏琴;段明军;侯月梅;;人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性[J];中国实验动物学报;2012年06期

相关会议论文 前10条

1 王沈玉;李敏;;人胃癌细胞株逆转的实验研究[A];第九届全国中西医结合肿瘤学术研讨会论文集[C];2002年

2 汤睿;朱正纲;瞿颖;李建芳;纪玉宝;刘炳亚;燕敏;林言箴;;温热体外对人胃癌细胞株生物学行为的影响[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

3 薛淑芳;许洪伟;;人胃癌细胞株MGC-803 FHIT基因转染对阿霉素敏感性的影响[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

4 胡晓;韩盛玺;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体对胃癌细胞MCG-803生长及基因表达的研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

5 舒晓亮;康凯;张颖琼;王兰芳;;L-精氨酸调控人胃癌细胞株SGC-7901凋亡及机制研究[A];第四届全国中西医结合营养学术会议论文资料汇编[C];2013年

6 吴涛;徐惠绵;姜成钢;于淼;贾兰玲;;TGF-β_1SiRNA抑制人胃癌细胞株SGC-7901腹膜转移的实验研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

7 刘辉;左静;郭建文;刘江惠;张杰英;左连富;;格尔德霉素对人胃癌细胞株MGC-803增殖与凋亡的影响[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年

8 禹立霞;谢丽;魏嘉;沈洁;钱晓萍;刘宝瑞;;异甘草酸镁对人胃癌细胞株药物敏感性相关基因表达的影响[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育（2014）[C];2014年

9 王淙;王赛琪;董然;郭刘斌;张素培;马俊远;刘宏民;;WZ-S19与紫杉醇联合作用对人胃癌细胞株MGC 803增殖的影响[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

10 闫石;徐岚;金治全;吴士良;;β3-GalT7基因正义与反义表达载体分别转染人胃癌细胞株SGC7901及其差异蛋白组学分析[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年

相关博士学位论文 前4条

1 李p，

本文编号：2415588