【摘要】：研究背景：卵巢癌是最常见的妇科肿瘤之一,卵巢癌患者发病较为隐匿、恶性程度高、且缺乏准确的早期诊断方法,约70%的患者在确诊时已属于中晚期,其病死率居女性生殖系统恶性肿瘤的第二位。肿瘤细胞减灭术加上术后化疗是中晚期卵巢癌的标准治疗方案。在满意的减瘤手术基础上辅助以紫杉醇+顺铂的术后化疗方案的治疗策略虽然明显改善了初治卵巢癌的预后,但晚期卵巢癌的5年生存率仍然维持在30%左右,而化疗后肿瘤复发或获得性耐药是导致术后治疗失败的主要原因之一。因此研究卵巢癌的化疗耐药机制,以及寻找关键的分子靶点并实现化疗增敏或逆转耐药是提高卵巢癌患者治愈率的关键。目前已有多项研究证实CXXC4通过负向调控Wnt/β-catenin和MAPK通路在肾细胞癌、胃癌的生长、侵袭及凋亡等多种病理进程中扮演着抑癌基因的角色,但其在卵巢癌发生发展中的作用仍不清楚。研究目的：本研究旨在探讨CXXC4在卵巢癌上皮细胞系中的表达情况,并通过质粒转染或RNA干扰技术调控CXXC4在卵巢癌上皮细胞与正常卵巢上皮细胞中的表达,进而观察调控CXXC4表达后卵巢癌上皮细胞增殖能力及对化疗药物敏感程度的改变,明确CXXC4生物学功能及在卵巢癌发生发展中的作用,为卵巢癌治疗过程中出现的多药耐药提供一个可能的新的分子靶标。研究方法：实验一：体外培养正常卵巢上皮IOSE80细胞以及人卵巢癌上皮SKOV3、Caov3细胞,运用Western blot与Real-Time PCR实验方法学检测CXXC4在卵巢癌细胞系中蛋白水平与基因水平表达情况。实验二：体外培养人卵巢癌上皮SKOV3、Caov3细胞和正常卵巢上皮IOSE80细胞,根据第一部分实验结果,通过将外源pcDNA3-CXXC4质粒载体稳定转染人卵巢癌上皮SKOV3、Caov3细胞以及siRNA-CXXC4介导转染人正常卵巢上皮IOSE80细胞后,运用Western blot与Real-Time PCR实验方法学从蛋白水平和mRNA水平验证CXXC4基因过表达与沉默细胞模型构建是否成功,待模型构建成功后运用CCK-8实验方法学进行细胞增殖与细胞对药物敏感性实验检测,根据CCK8检测结果经统计分析后获得阿霉素(ADM)、紫杉醇(TA)、顺铂(DDP)对细胞的IC50值,观察调控CXXC4表达后细胞对化疗药物敏感性的改变。研究结果：1.通过Western blot法与Real-Time PCR实验方法检测,发现CXXC4在正常卵巢上皮IOSE80细胞与卵巢癌上皮SKOV3、Caov3细胞中均有表达。经Western blot检测发现,卵巢癌上皮细胞中的CXXC4蛋白表达水平较正常卵巢上皮细胞显著降低；经Real-Time PCR检测发现,卵巢癌上皮细胞中的CXXC4基因水平也较正常卵巢上皮细胞显著降低。2.运用CKK8检测发现,卵巢癌上皮SKOV3、Caov3细胞外源转染pcDNA3-CXXC4质粒过表达CXXC4后,与对照组相比,pcDNA3-CXXC4转染组细胞的增殖能力在72h后均有所下调,且其对ADM、TA及DDP的IC50显著降低,说明对这三类化疗药物敏感性增强。3.运用CKK8检测发现,正常卵巢上皮IOSE80细胞使用siRNA干扰敲低CXXC4的表达后,与对照组相比,在96h后CXXC4干扰组较对照组细胞的增殖能力均有所上调；且CXXC4干扰组对ADM、TA及DDP的IC50较对照组也显著提高,说明对这三类化疗药物敏感性降低。结论：CXXC4在卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,卵巢癌上皮细胞系与正常卵巢上皮CXXC4表达的差异提示,CXXC4可能在卵巢癌在发生发展的过程中发挥着重要作用。当通过质粒转染技术上调CXXC4的表达后,卵巢癌细胞系其不仅增殖能力下降,且对ADM、TA及DDP的化疗敏感性显著升高；而通过siRNA干扰降低正常卵巢上皮细胞的CXXC4的表达则可促进细胞的增殖能力,且细胞对ADM、TA及DDP的化疗疗效更加耐受,这说明卵巢癌细胞中的CXXC4的表达与肿瘤细胞的增殖及化疗药物的敏感性相关,提示卵巢癌患者组织中的CXXC4的表达可能与患者的预后相关,外源过表达CXXC4可使卵巢癌细胞增殖能力下降且对化疗更加敏感,提示其可能作为促进化疗疗效的一个分子靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
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本文编号：2437209
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