尼妥珠单抗对不同EGFR表型食管癌细胞放疗增敏作用及其机制研究

发布时间：2019-03-29 11:59

【摘要】：研究背景食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤,我国是食管癌的高发地区,发病总数占全球食管癌46.6%,其发病率及死亡率为恶性肿瘤的第4位。早期中下段食管癌可通过手术切除,尚有治愈的机会,但食管癌没有特异的临床症状,大部分患者就诊时已经失去了手术机会。对于不可手术切除的局部晚期及上段食管癌患者,放射治疗是其主要治疗手段,但食管癌患者耐受性较差,单纯放疗/放化疗的局部控制率上不满意。分子靶向药物为提高放疗的敏感性带来新的希望。表皮生长因子受体(EGFR)是肿瘤研究中最为深入的一个靶点,EGFR通路的异常激活能促进正常细胞的转化和恶性肿瘤放射抗拒的产生。食管鳞癌组织中EGFR的阳性率达40～80%。尼妥珠单抗是以EGFR为靶点的人源化单克隆抗体,能和EGFR胞外结构域Ⅲ区特异性结合,EGFR与配体的结合被阻断,下游信号通路的转导也随之被阻断,增强了肿瘤细胞放射敏感性,提高放疗疗效及抑制肿瘤生长、转移及局部复发。目前临床上尼妥珠单抗已开始用于鼻咽癌的放射增敏治疗,食管癌放疗增敏作用也有相应研究。但临床上尚无合适的疗效预测分子标志物。本研究将对尼妥珠单抗对食管细胞的放射敏感性进行研究,并探讨尼妥珠单抗的放疗增敏机制。实验方法我们用MTT方法检测尼妥珠单抗对各细胞株增殖的影响。我们用克隆形成实验来检测尼妥珠单抗的放疗增敏作用。用50ug/ml,100 ug/ml 200ug/ml三种不同浓度的尼妥珠单抗作用KYSE410,KYSE30,KYSE520食管细胞24小时,再分别给予0、1、2、4、6、8Gy剂量照射。对照组细胞普通培养液培养24小时,然后相同方法照射相同剂量。我们对尼妥珠单抗对食管癌细胞增敏作用的机制做了研究。用Western blot检测KYSE410,KYSE30,KYSE520三种食管癌细胞的EGFR表达,及其磷酸化程度。我们进一步检测PI3K/AKT信号通路上的关键蛋白AKT及Ras/Rad/MEK/MAPK信号通路上的关键蛋白MAPK。实验结果MTT实验说明不同浓度的尼妥珠单抗对KYSE30,KYSE410,KYSE520细胞的增殖抑制不明显。克隆形成实验的结果提示浓度为200ug/ml尼妥珠单抗对KYSE30细胞有放射增敏作用,而低浓度的尼妥珠单抗对KYSE30细胞放疗增敏作用不显著。尼妥珠单抗对KYSE410,KYSE520细胞无明显放射增敏作用。研究发现KYSE30食管癌细胞EGFR高表达,磷酸化程度较高;KYSE410食管癌细胞EGFR高表达,磷酸化程度较低;KYSE520食管癌细胞EGFR低表达。结果发现EGFR高表达并且磷酸程度较高KYSE30细胞的AKT蛋白经尼妥珠单抗处理后其磷酸化受到抑制,而EGFR磷酸化程度较低的KYSE410细胞和EGFR低表达KYSE520细胞AKT蛋白的表达及磷酸化均无明显变化。三株细胞的Ras/Rad/MEK/MAPK信号通路上的MAPK蛋白在尼妥珠单抗处理前后的表达及磷酸化程度均无明显改变。本研究的实验结果提示尼妥珠单抗的放疗增敏机制可能与PI3K/AKT信号通路的抑制有关。结论尼妥珠单抗对EGFR高表达且磷酸化程度较高的食管癌细胞有放疗增敏作用,增敏作用存在量效关系,增敏机制可能与其抑制EGFR下游信号传导通路PI3K/AKT 有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.1
，

本文编号：2449523