LIMK1高表达对罗格列酮抑制MGC803细胞增殖、迁移与侵袭的影响

发布时间：2019-04-23 15:50

【摘要】：目的:通过构建LIMK1高表达的人胃癌MGC803细胞,观察LIMK1对罗格列酮(Rosiglitazone,ROS)抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其作用机制。方法:构建含有高表达LIMK1的EX-C0763-M98-5真核表达载体并用其转染MGC803细胞。用RT-PCR及Western blot验证ROS处理前后细胞中LIMK1 m RNA及蛋白的表达。流式细胞术、CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室迁移、侵袭实验检测ROS处理前后,过表达LIMK1对MGC803细胞周期、细胞增殖、迁移及侵袭能力的作用。结果:1.成功地构建了过表达LIMK1的EX-C0763-M98-5真核表达载体细胞。测序结果显示成功构建了EX-C0763-M98-5真核表达载体。用该质粒转染MGC803细胞后,检测细胞的绿色荧光提示成功转染了MGC803细胞。RT-PCR及Western blot实验显示,EX-C0763-M98-5真核表达载体细胞中的LIMK1 m RNA与蛋白表达水平较对照组上调,差异有统计学意义(P0.05)。而转染空载体EX-NEG-M98的MGC803细胞与对照组相比,LIMK1的m RNA及蛋白表达水平无统计学差异(P0.05)。2.ROS对高表达LIMK1的MGC803细胞m RNA表达及蛋白表达的影响。RT-PCR及Western blot结果提示,ROS作用前,LIMK1高表达的MGC803细胞m RNA及蛋白表达高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P0.05)。ROS作用后,对照组和空载体组的m RNA及蛋白表降低,差异有统计学意义(P0.05);而用ROS处理前后,过表达LIMK1的MGC803细胞m RNA及蛋白表达水平无统计学差异(P0.05)。3.ROS对高表达LIMK1的MGC803细胞增殖的影响CCK-8实验显示用ROS分别处理MGC803细胞1、2、3天后,MGC803细胞增殖率分别为34.84%、75.81%和80.16%(P0.05),而高表达LIMK1的MGC803细胞增殖率分别为66.59%、136.43%及245.52%(P0.05);ROS处理前后,过表达LIMK1的MGC803细胞活力无统计学差异(P=0.36)。平板克隆形成实验显示,ROS作用前,LIMK1高表达的细胞的相对集落形成率37.3%,高于对照组25.3%和空载体组24.0%,差异具有统计学意义(P0.05)。ROS作用后,对照组和空载体组的集落形成率分别下降为15.3%和14.7%,差异具有统计学意义(P0.05)。而ROS处理前后,过表达LIMK1的MGC803细胞相对集落形成率与对照组相比无明显统计学差异(P=0.14)。4.ROS对高表达LIMK1的MGC803细胞周期的影响。流式细胞实验显示,ROS处理前,LIMK1高表达MGC803细胞G2/M期百分率(%)25.27±2.53,高于对照组14.6±1.47和空载体组14.18±2.21,差异具有统计学意义(P0.05);ROS处理后,对照组和空载体组G0/G1期百分率增高,分别为64.6±3.27与65.7±1.60,差异具有统计学意义(P0.05),G2/M期百分率分别为8.95±0.65与8.61±1.31,而高表达组与ROS作用前后的无统计学意义。5.ROS对高表达LIMK1的MGC803细胞迁移、侵袭的影响。Transwell迁移实验显示,MGC803细胞迁移24h后,ROS处理前LIMK1高表达组穿膜细胞数196±7个大于MGC803组158±3个及空载体组160±4个,差异具有统计学意义(P0.05)。ROS处理后,MGC803组和空载体组穿膜细胞减少,分别为69±1以及69±3个,差异具有统计学意义(P0.05),而高表达LIMK1(导入外源性LIMK1)后,ROS处理过的MGC803细胞迁移能力恢复193±9个。侵袭实验显示,MGC803细胞侵袭48h后,ROS处理前LIMK1高表达组穿膜细胞数112±1个大于MGC803组73±2个及空载体组76±2个,差异具有统计学意义(P0.05)。ROS处理后,MGC803组和空载体组穿膜细胞减少,分别为47±1以及46±4个,差异具有统计学意义(P0.05),而高表达LIMK1(导入外源性LIMK1)后,ROS处理过的MGC803细胞侵袭能力恢复110±2个。结论:1.LIMK1高表达可促进MGC803细胞增殖、迁移及侵袭。2.ROS能抑制MGC803细胞增殖、迁移及侵袭。3.LIMK1可能是ROS抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移及侵袭作用的靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

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本文编号：2463602