S100A9在骨肉瘤中的表达和对骨肉瘤功能作用的影响及相关机制的研究

发布时间：2019-04-30 13:46

【摘要】：研究背景和目的:骨肉瘤(Osteosarcoma)是最常见骨肿瘤之一,常发生于儿童和青少年。它以侵袭性生长、高局部复发率及远期生存率不佳而闻名。约有50%的病例会发生早期转移,尤其是肺转移。该疾病的治疗方法主要为手术切除及手术前后放化疗等,但据最新的文献统计报道,传统的治疗效果均不佳。近年来,国内外众多学者提出靶基因治疗,并期待该治疗方案成为治疗该疾病的新策略。S100A9最早被发现是一种中性粒细胞表达和分泌的免疫蛋白,后来的研究表明S100A9是急性和慢性炎症中最重要的炎症介质之一。近期发现S100A9在肿瘤发生和肿瘤微环境中也有重要的作用。此次实验的研究目的是探寻S100A9在骨肉瘤中的表达以及S100A9对骨肉瘤增殖、迁徙、侵袭等功能的影响及相关机制。方法:1.收集骨肉瘤病例及相关病人资料;2.应用组织芯片技术、荧光定量PCR和western blot分析S100A9在骨肉瘤病理组织标本中的表达情况;3.采用RNAi技术下调三种骨肉瘤细胞(U2OS、143B、MG63)中s100a9的表达;4.应用荧光定量pcr和westernblott法验证转染后s100a9的mrna和蛋白表达情况;5.应用cck8法检测转染后三种骨肉瘤细胞在体外增殖能力的变化;6.应用流式细胞技术检测转染后三种骨肉瘤细胞细胞周期的变化;7.应用流式细胞技术检测转染后三种骨肉瘤细胞细胞凋亡的变化8.transwell迁徙实验检测转染后三种骨肉瘤细胞迁徙能力的变化;9.transwell侵袭实验检测转染后三种骨肉瘤细胞侵袭能力的变化;10.裸鼠皮下成瘤实验检测转染后骨肉瘤在体内增殖能力的改变;11.通过免疫组织化学技术对荷瘤pcna和ki67增殖指数进行分析,进一步证实下调s100a9对骨肉瘤增殖的影响;12.westernblot和酶活性检测法探寻在三种骨肉瘤细胞中下调s100a9对mapk和nf-κb两条信号通路的影响;13.westernblott法和酶活性检测法探寻在三种骨肉瘤细胞中下调s100a9后对细胞周期依赖激酶抑制剂p21和p27的影响;14.酶活性检测法探寻在三种骨肉瘤细胞中,下调s100a9后对细胞周期依赖激酶cdk2和cdk4的影响。结果:1.本研究一共纳入了120例骨肉瘤病理标本和40例正常的骨组织标本,根据enneking分期将所有的骨肉瘤病例资料分为了i期、ii期和iii期;2.组织芯片技术表明s100a9在骨肉瘤病理组织中呈高表达,95%的病例为阳性;s100a9的染色区域分布在细胞核(21/120,17.5%)、细胞胞浆(24/120,20%),两者均表达(69/120,57.5%),但是在这三部分的染色指数分析没有统计学意义(p0.05)。同时,对性别、年龄和发病部位的染色指数分析也没有统计学意义的(p0.05)。并且发现,高级别骨肉瘤病例的染色指数是明显高于低级别骨肉瘤病例,gradei的染色指数为2.2±1.4,gradeii的染色指数为3.3±1.3,gradeiii的染色指数为4.2±0.9,且有统计学意义(p0.05,除了i期和ii期之间没有统计学意义)。我们也对所收集的病理标本进行了荧光定量pcr的检测,其结果与免疫组织化学结果相吻合;3.应用荧光定量pcr和westernblot技术验证了下调s100a9后mrna水平和s100a9的蛋白表达水平明显降低,且有统计学意义(p0.05),这证明我们建立细胞模型是成功的;4.cck8法表明,在体外实验中,下调s100a9后能够明显抑制三种骨肉瘤细胞的增殖,且有统计学意义(p0.05);5.流式细胞技术对细胞周期的检测表明下调s100a9能够使骨肉瘤细胞停留在细胞周期的g0/g1期,减缓进入s期的数量,从而抑制了骨肉瘤细胞的生长周期,进而抑制了细胞生长(p0.05);6.流式细胞技术对细胞周期的检测表明s100a9对骨肉瘤的凋亡没有影响(p0.05);7.transwell迁徙实验表明下调s100a9后能降低三种骨肉瘤细胞的迁徙能力:u20s组从每视野84±5个细胞下降到42±6个细胞;143b组每视野81±4个细胞下降到44±5个细胞;mg63从78±4个细胞下降到55±4个细胞(p0.05);8.transwell侵袭实验表明下调s100a9能降低三种骨肉瘤细胞的侵袭能力:u20s组从每视野58±7个细胞下降到38±4个细胞;143b组每视野62±4个细胞下降到43±5个细胞;mg63从67±4个细胞下降到49±5个细胞(p0.05);9.裸鼠成瘤实验证明了在体内实验中,下调s100a9能够影响骨肉瘤的生长(p0.05);10.免疫组织化学表明下调s100a9明显降低了荷瘤pcna和ki67的增殖指数。pcna免疫组织化学结果显示:u2os从60±5%下降到39±4%;143b从66±7%下降到43±6%;mg63从63±6%下降到42±4%(p0.05)。ki67免疫组织化学结果显示:u2os从58±7%下降到41±4%;143b从69±9%下降到47±6%;mg63从68±5%下降到42±7%(p0.05);11.westernblot和酶活性检测表明下调s100a9能够抑制骨肉瘤细胞中磷酸化的erk1/2mapk、p50nf-κb、p65nf-κb的表达,而不能抑制磷酸化p38mapk的表达;12.westernblot表明下调s1000a9能够激活骨肉瘤细胞中细胞周期依赖激酶抑制剂p21和p27的表达;13.酶活性检测表明下调s100a9能抑制骨肉瘤细胞中细胞周期依赖激酶CDK2和CDK4的表达,进而影响细胞生长。结论:此次研究通过体内外实验证实了下调S100A9的表达能够影响骨肉瘤的增殖、迁徙和侵袭能力,并能通过抑制MAPK和NF-κB两条通路的表达,进而激活p21和p27,抑制CDK2和CDK4的表达。这为骨肉瘤的靶基因治疗提供了实验依据。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李继庆;高危骨肉瘤的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2003年13期

2 胡牧,钱光,梅炯,蔡宣松;骨肉瘤的肺外转移[J];国外医学.骨科学分册;2004年03期

3 刘洪彪,叶小娟,占宏伟,孙达;骨肉瘤放射性核素骨显像50例分析[J];实用肿瘤杂志;2005年01期

4 周忠;林建华;;骨肉瘤的中西医结合治疗研究进展[J];甘肃中医;2006年03期

5 杨茂伟;王加璐;王旭东;罗辑;;X线表现阴性骨肉瘤的早期诊断[J];中国肿瘤临床;2008年22期

6 张淑彬;吴朝平;;骨肉瘤患者父母的焦虑状况调查分析[J];华西医学;2008年06期

7 徐新华;周福祥;;20例儿童骨肉瘤的临床治疗[J];中医儿科杂志;2008年02期

8 王建华;林艳;贾卫斗;云得才;许英杰;郑铁钢;;骨肉瘤的诊断与治疗[J];现代中西医结合杂志;2010年30期

9 李毅星;闫文涛;杨本华;;骨肉瘤31例早期诊断分析[J];中国煤炭工业医学杂志;2010年11期

10 徐欣华;李晓琴;杨荣;刘芳;康雅琼;何欣;尚立娜;;血小板衍生生长因子受体-a在骨肉瘤中的表达及意义[J];甘肃医药;2012年11期

相关会议论文 前10条

1 许少健;张葆青;刘金文;石宇雄;黄永明;;16例骨肉瘤患者化疗期间的相关心理分析[A];中华中医药学会骨伤分会第四届第二次会议论文汇编[C];2007年

2 马月新;;骨肉瘤化疗期间的护理对策[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2005年

3 陈秋;王达辉;闵若良;马巍;;应用大段异体骨治疗儿童骨肉瘤的初步体会[A];2007年浙江省医学会骨科学学术会议暨浙江省抗癌协会骨软肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年

4 郑进佑;;骨肉瘤的现代外科治疗概况[A];全国中西医结合学会骨伤科专业委员会第十二次学术年会浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十次学术年会论文汇编[C];2004年

5 余宁先;;骨肉瘤病人家属的心理护理[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2004年

6 汪伟;陈文直;周洁敏;白玲;刘文英;叶慧义;;高强度聚焦超声治疗骨肉瘤的临床应用研究[A];中华医学会超声医学新进展学术会议论文汇编[C];2004年

7 曹庆选;李文华;曹来宾;夏宝枢;;中药治愈骨肉瘤的中医研究与影像学对照[A];第十次全国中西医结合影像学术研讨会暨全国中西医结合影像学研究与诊断学习班资料汇编[C];2009年

8 王英;肖舰;陈晓华;;骨肉瘤病人癌性疼痛的护理体会[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2003年

9 陈秋;王达辉;闵若良;马巍;;大段异体骨治疗儿童骨肉瘤的初步应用[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年

10 刘巧慧;韩莎莎;;骨肉瘤保肢患者的心理护理[A];全国外科、神经内外科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2006年

相关重要报纸文章 前1条

1 张中桥;骨肉瘤病理基础与其MRI表现[N];中国医药报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 刘义庆;雄烯二酮衍生物DSTD诱导骨肉瘤细胞自噬和减轻其耐药性的研究[D];山东大学;2015年

2 尚永军;TIM-3在骨肉瘤侵袭转移中的作用及机制研究[D];延边大学;2015年

3 禚文昆;MiR-20a调节EGR2对骨肉瘤的影响[D];第四军医大学;2015年

4 高琰;CD44在卵巢癌/骨肉瘤进展中的作用及上转换纳米逆转肿瘤耐药的研究[D];郑州大学;2016年

5 赵加力;B7-H3在骨肉瘤微环境中的表达及其作用机制[D];苏州大学;2016年

6 林博川;MicroRNA-184在骨肉瘤阿霉素耐药中的功能与机制研究[D];南方医科大学;2016年

7 包拥政;miR-664调控靶基因SOX7促进MG-63骨肉瘤细胞体外侵袭和迁移机理研究[D];南方医科大学;2016年

8 陈斌;miR-664下调靶基因FOXO4促进骨肉瘤细胞恶性增殖及机制研究[D];南方医科大学;2016年

9 闫广宁;骨肉瘤干细胞自我更新的调控机制及意义[D];第三军医大学;2016年

10 程思;S100A9在骨肉瘤中的表达和对骨肉瘤功能作用的影响及相关机制的研究[D];重庆医科大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 关国锋;CXCR4靶点近红外光学分子成像检测骨肉瘤原位及肺转移肿瘤病灶的研究[D];第四军医大学;2015年

2 王志涛;CD44s、CD44v6及CD44v9在骨肉瘤、骨巨细胞瘤及骨软骨瘤标本的表达及临床意义[D];吉林大学;2016年

3 荣小丽;LIMK1基因稳定转染骨肉瘤耐药细胞系的建立及其增殖侵袭能力的研究[D];吉林大学;2016年

4 关红亚;miR-192靶向TCF7基因对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用[D];郑州大学;2016年

5 闫红卫;骨肉瘤临床诊治的影像学检查优化探讨[D];广西医科大学;2016年

6 刘京伟;小儿长管骨骨毮炎与骨肉瘤影像学对比研究[D];山东大学;2016年

7 王坤;GRM4基因多态性与骨肉瘤的遗传易感性及临床病理特征的相关性研究[D];广西医科大学;2016年

8 王汀;骨肉瘤治疗研究进展[D];重庆医科大学;2016年

9 杜飞舟;骨肉瘤~（31）P磁共振波谱研究[D];第三军医大学;2008年

10 张波;43例骨肉瘤患者预后的多因素分析[D];浙江大学;2010年

，

本文编号：2468803