Fbxw7通过RhoA信号通路调控胃癌细胞凋亡、生长抑制及上皮间质转化的分子机制研究

发布时间：2019-05-12 08:57

【摘要】：背景和目的:胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率均位于前列,同时其5年生存率仅为5%-15%。目前的研究认为,胃癌的难治性可能与其早期的转移密切相关。上皮间质转化(EMT)是针对上皮细胞来源的肿瘤发生转移的研究热点,其本身是机体生理病理过程的关键部分,当EMT发生时,上皮细胞则表现出间质细胞的表型,使其具有更高的侵袭性和迁移性。因此,通过研究胃癌细胞EMT发生潜在的分子机制,可能为降低胃癌的早期转移及提高胃癌的预后提供潜在的依据。本研究首先在胃癌组织及其对应的癌旁正常组织,胃癌不伴有转移组织和胃癌伴有血管或浆膜或淋巴结转移组织中分别检测Fbxw7的表达情况,同时对胃癌患者Fbxw7的表达及其临床病例资料之间的关系进行分析;其次,通过在胃癌细胞中过表达或干扰Fbxw7,然后分别检测转染前后胃癌的细胞学功能及EMT相关的分子标记物的变化;最后,分别在胃癌组织及细胞中对Fbxw7及RhoA的相关性进行分析,同时对两者的相关性进行深入探讨并在胃癌细胞中共转染Fbxw7及RhoA,然后分别检测共转染前后胃癌细胞的细胞学功能及EMT相关分子标记物的变化。方法:(1)通过免疫组化检测60例胃癌组织及对应癌旁正常组织中Fbxw7的表达情况,通过WB技术对20例胃癌组织及对应癌旁正常组织、10例胃癌不伴有转移组织及胃癌伴有血管或浆膜或淋巴结转移组织各10例中的Fbxw7的表达进行检测,同时对胃癌患者Fbxw7的表达及其临床病例资料之间的关系进行分析。(2)通过病毒转染外源性的过表达或干扰Fbxw7的表达,采用WB,CCK8细胞增殖,细胞侵袭迁移,细胞凋亡,免疫荧光等实验方法分析胃癌细胞中Fbxw7表达水平的变化对胃癌细胞分子生物学及细胞生物学的影响。(3)通过免疫组化、WB技术及RT-PCR技术对胃癌组织和细胞中Fbxw7及RhoA两者的相关性进行分析,同时采用免疫共沉淀技术进一步分析Fbxw7是通过何种分子机制调控RhoA的表达的。采用病毒转染外源性的过表达或干扰Fbxw7或RhoA表达,通过WB,共转染,CCK8细胞增殖,细胞侵袭迁移,细胞凋亡,免疫荧光等实验方法,评估Fbxw7表达水平的高低对胃癌细胞分子生物学及细胞生物学的影响的分子机制。结果:(1)Fbxw7在胃癌中为抑癌基因,在胃癌组织中Fbxw7的表达显著低于癌旁正常组织中的表达。同胃癌伴有血管或浆膜或淋巴结转移组织相比较,在胃癌不伴有转移组织中Fbxw7的表达显著增高。通过对胃癌患者临床病例资料分析发现,Fbxw7的表达水平同肿瘤大小、TNM分期、血管浸润、浆膜浸润及淋巴结转移密切相关,而同患者的年龄、性别及病理类型无关。通过Kaplan-Meier生存分析发现Fbxw7同胃癌患者的预后密切相关。(2)通过外源性基因片段转染过表达或干扰Fbxw7后发现Fbxw7的高表达可以促进胃癌细胞凋亡及生长抑制同时抑制胃癌细胞的侵袭及迁移,从而抑制上皮间质转化的上游转录因子Snail 1和ZEB 1而抑制EMT;然而Fbxw7干扰后发生截然相反的现象。(3)通过相关性分析发现Fbxw7同RhoA在蛋白水平呈显著负相关,而在mRNA水平则无相关性,并且通过pull-down实验发现Fbxw7高表达可显著下调RhoA及GTP-RhoA的表达水平。通过免疫共沉淀我们发现两者间相互作用的具体机制为Fbxw7通过泛素化修饰及蛋白水解作用对RhoA的表达进行调控。最后通过共转染实验发现Fbxw7调控胃癌细胞凋亡、生长抑制及上皮间质转化(EMT)是可以部分通过调控RhoA信号通路实现的。结论:在胃癌中,Fbxw7可以调控RhoA的表达,而且可以部分通过调控RhoA信号通路而促进胃癌细胞凋亡和生长抑制及抑制胃癌细胞上皮细胞间质转化。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2

【参考文献】

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1 Ya-Chao Hou;Jing-Yu Deng;;Role of E3 ubiquitin ligases in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年03期

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本文编号：2475264