miR153通过下调ANGPT1抑制原代血管内皮细胞的迁移与管腔形成

发布时间：2019-07-17 16:30

【摘要】：乳腺癌(Breast Cancer,BC)是当前一种常见的严重危害女性身心健康的恶性肿瘤。然而,乳腺癌具体的发病机理与分子机制至今仍尚未完全了解清楚。从分子水平进一步了解乳腺癌的发生发展机制,探索新颖有效的乳腺癌诊断方案及治疗靶点,对于乳腺癌的早期诊断及有效治疗具有深远意义。微小RNA153,miRNA153,在多种肿瘤中对细胞增殖,侵袭,以及转移过程都具有重要调控作用。我们前期的研究工作显示miR153能有效抑制乳腺癌血管的管腔形成,但其中的机制并不完全清楚,在本研究中,我们对其进行了进一步的探索。为探究miR153的靶基因,我们应用microRNA靶基因在线分析软件,预测miRNA153可能的靶基因,我们发现miRNA153可能靶向ANGPT1的3'UTR。通过人工合成miR153模拟物,瞬时转染高表达ANGPT1的细胞系MCF7,Western Blot结果显示miR153能够有效地下调ANGPT1蛋白的表达。进一步通过构建ANGPT1 3'UTR双荧光素酶报告基因载体,发现miR153能够靶向ANGPT1的3,UTR,进而调控ANGPT1的表达。我们通过在MCF7细胞系中转染miR153的模拟物,检测到ANGPT1的下调后,用MCF7的条件培养基处理HUVEC细胞,再采用EdU实验检测HUVEC细胞的增殖,采用划痕实验检测HUVEC细胞的迁移,管腔形成实验检测HUVEC细胞的管腔形成能力。结果表明,miR153及ANGPT1敲低的MCF7条件培养基没有明显抑制HUVEC细胞的增殖,但对HUVEC细胞迁移以及管腔形成能力都具有显著的抑制作用。同时,HUVEC直接转染miR153 mimics后,其迁移能力以及管腔形成受到明显抑制。另外,为了进一步探索miR153是否通过靶向ANGPT1抑制血管内皮细胞的功能,我们构建了 ANGPT1的过表达质粒,后期将通过稳定过表达的细胞系,转染miR153后收集条件培养基处理HUVEC细胞,检测过表达ANGPT1对miR153功能的回复效果。综上所述,miR153能够靶向ANGPT1的3'UTR,进而下调ANGPT1,可能通过该机制导致其对HUVEC细胞的迁移和管腔形成能力都有一定的抑制作用。本文发现了一个乳腺癌在血管形成方面发生发展的新的分子机制,为乳腺癌的深入研究,早期诊断以及有效治疗提供了一些新的思路。
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】