Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系

发布时间：2019-07-25 16:33

【摘要】：目的探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系。方法实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10μg/ml)作用24h组。利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,5和10μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P0.05)。10μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响。结论乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力。乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路。
【图文】：

组蛋白对人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力的影响用5μmol/LSrc激酶的特异性抑制剂pp2或1μmol/Lp38激酶特异性抑制剂SB203580预处理人胃癌MGC-803细胞3h后，再加入10μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白作用24h，经划痕迁移实验显示，人胃癌MGC-803细胞的迁移距离较单纯由10μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白作用24h的人胃癌MGC-803细胞迁移距离明显变短(t=－13.00、－11.92，P＜0.01)(图2A);经Transwell小室试验显示，人胃癌MGC-803细胞穿过小室的细胞数较单纯由10μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白作用24h后穿过小室的细胞数明显减少(t=－85.23、－83.93，P＜0.01)(图2B)。可见，Src激酶的特异性抑制剂pp2和p38激酶特异性抑制剂SB203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力。图2抑制Src激酶和p38激酶后人乙酰肝素酶重组蛋白对人胃癌MGC-803细胞迁移和基质侵袭能力的影响A:人胃癌MGC-803细胞相对迁移距离;B:人胃癌MGC-803细胞侵袭能力;1:10μg/ml处理组;2:pp2+处理组;3:SB203580+处理组;与10μg/ml处理组比较:＊＊P＜0.012．3人乙酰肝素酶重组蛋白对人胃癌MGC-803细胞中p-Src和p-p38蛋白表达的影响经Westernblot检测显示，与正常对照组相比，10μg/ml处理组作用人胃癌MGC-803细胞24h后，p-Src和p-p38蛋白表达均明显升高(t=13.85、20.11，P＜0.01)，而Src和p38蛋白表达均无明显变化(图3)。图3Westernblot法检测人乙酰肝素酶重组蛋白对人胃癌MGC-803细胞p-Src和p-p38蛋白表达的影响1:正常对照组;2:10μg/ml处理组;与正常对照组比较:＊＊P＜0.012．4SGC-7901-Heparanasel(－)细胞中p-Src和p-p38蛋白的表达Westernblot检测显示，与高表达乙?

艘阴８嗡孛钢刈榈鞍锥?人胃癌MGC-803细胞迁移和基质侵袭能力的影响A:人胃癌MGC-803细胞相对迁移距离;B:人胃癌MGC-803细胞侵袭能力;1:10μg/ml处理组;2:pp2+处理组;3:SB203580+处理组;与10μg/ml处理组比较:＊＊P＜0.012．3人乙酰肝素酶重组蛋白对人胃癌MGC-803细胞中p-Src和p-p38蛋白表达的影响经Westernblot检测显示，与正常对照组相比，10μg/ml处理组作用人胃癌MGC-803细胞24h后，p-Src和p-p38蛋白表达均明显升高(t=13.85、20.11，P＜0.01)，而Src和p38蛋白表达均无明显变化(图3)。图3Westernblot法检测人乙酰肝素酶重组蛋白对人胃癌MGC-803细胞p-Src和p-p38蛋白表达的影响1:正常对照组;2:10μg/ml处理组;与正常对照组比较:＊＊P＜0.012．4SGC-7901-Heparanasel(－)细胞中p-Src和p-p38蛋白的表达Westernblot检测显示，与高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞相比，SGC-7901-Heparanasel(－)细胞中p-Src和p-p38蛋白表达明显下降(t=－24.78、－44.52，P＜0.01)(图4)。2．5Src激酶和p38激酶特异性抑制剂对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达的影响5μmol/Lpp2和1μmol/LSB203580作用人胃癌SGC-7901细胞24h后，，经Westernblot检测显示，人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白的表达无明显变化(图5)。2．6Src激酶特异性抑制剂对人胃癌细胞中p-p38蛋白表达的影响和p38激酶特异性抑制剂对人胃癌细胞中p-Src蛋白表达的影响经Westernblot检测显示，5μmol/L的pp2作用人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞24h后，细胞中p-p38蛋白表达均明显降低(t=－13.47、－25.76，P＜0.01)(图6)。而1μmol/L的SB203580作用人胃癌SGC-7901和·948·安徽医科大学学报ActaUniversitatisM
【作者单位】： 内蒙古医科大学附属医院病理科;
【基金】：国家自然科学基金(编号:30660065) 中支地学校匹配经费(编号:X206017001)
【分类号】：R735.2

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本文编号：2519211