c-Met小分子酪氨酸激酶抑制剂ARQ197对肺腺癌细胞放射增敏作用及其机制的实验研究

发布时间：2019-07-26 17:37

【摘要】：目的:研究和探讨c-Met小分子酪氨酸激酶抑制剂ARQ197是否对肺腺癌细胞有放射增敏作用,若具有放射增敏作用则进一步探讨其放射增敏的可能机制,为ARQ197作为增敏剂应用于肺癌放射治疗提供实验依据。方法:采用人肺腺癌细胞系A549、H1299体外培养作为研究对象。首先用不同系列浓度的重组人肝细胞生长因子(HGF)和ARQ197分别处理肺腺癌细胞,应用克隆形成试验检测细胞增殖情况,筛选出用于放射敏感性研究的HGF和ARQ197的合适浓度。随后将肺腺癌细胞分为以下四组:对照组、HGF处理组、ARQ197处理组、HGF和ARQ197共同处理组,应用细胞克隆形成试验,绘制放射后细胞存活曲线,观察不同组别之间放射敏感性的差异。而后用HGF单独或联合应用不同浓度的ARQ197分别处理肺腺癌细胞,应用蛋白印记检测HGF单独或联合应用不同浓度ARQ197对细胞c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表达和活化的影响。最后将肺腺癌细胞分为:对照组、ARQ197处理组,观察两组接受2Gy照射前和照射后6h、9h c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表达和活化水平的变化。结果:肺腺癌细胞的克隆形成率随着HGF浓度的增加呈进行性升高,而随着ARQ197浓度的增加则进行性下降。放射后细胞存活曲线示对照组、HGF处理组、HGF和ARQ197共同处理组及ARQ197处理组的SF2值,A549细胞分别为48.28±2.16%、82±2.62%、41.53±1.71%和38.91±1.71%,H1299细胞分别为58.41.±3.47%、85.23±6.07%、44.80±3.47%和43.30±2.96%。HGF、HGF和ARQ197共同处理及ARQ197对A549肺腺癌细胞的放射增益比分别为0.79、1.11、1.19,对H1299肺腺癌细胞的放射增益比分别为0.85、1.20、1.27。H1299细胞在HGF刺激后,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2高表达,同时应用ARQ197,随着ARQ197浓度的增加,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表达进行性下降。细胞接受2Gy照射后,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2高表达;同时应用ARQ197,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表达显著下降,总的c-Met、Akt和Erk1/2蛋白的表达水平无明显变化。结论:通过平板克隆形成分析法,我们可以得出ARQ197对人肺腺癌细胞有一定的放射增敏作用。通过蛋白印记检测,我们进一步得出ARQ197通过抑制HGF/c-Met及其下游传导通路的活化对离体肺腺癌细胞株有显著的放射增敏作用。通过此实验,为ARQ197作为放射增敏剂运用于肺腺癌的联合治疗提供实验依据。
【图文】：

1 细胞形态学观察A549、H1299 细胞复苏后 4～6h 散在贴壁，为梭形、类圆形或多角形，胞浆，单层生长，一般 10～12 天形成克隆。（见图 1）

HGF单独或联合应用不同浓度ARQ197对cMet及其下游Akt和Erk1/2蛋白表达和活化的影响
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：2519692