DSCR1-1L在肿瘤血管生成中的调节作用及细胞内机制研究

发布时间：2019-07-29 14:20

【摘要】：研究背景和目的：针对VEGF和其他上游靶点的抗血管生成疗法面临耐药,副作用大等挑战,无法使大部分病人在临床获益。血管生成上下游靶点众多,作用机制复杂,迫切需要寻求一个可以避开VEGF上游信号通路的下游共同靶点。前期研究发现DSCR1-1L是VEGF的下游靶点,但DSCR1-1L在HUVEC如何介导其他因子的功能及其作用机制尚不明确。研究方法：通过Western blot检测不同时间点各刺激物对DSCR1-1L蛋白表达水平：通过重组腺病毒构建制备DSCR1-1L, TEF3和YAP1特异性的cDNA和shRNA进行"knockin”和"knock down"实验；采用CCK-8细胞增殖实验和单层细胞划痕实验分别检测HUVEC细胞增殖和迁移并用EVOS细胞成像系统观察细胞形态改变；Western blot检测HUVEC内细胞质和细胞核蛋白内TEF3和YAP1在不同刺激条件下的表达情况；通过免疫共沉淀和蛋白免疫印迹实验检测TEF3和YAP1蛋白与蛋白之间的关系。实验结果：VEGFE,VEGF121, Histamine,ASPC-1 CM,Panc-1 CM,B16F10 CM,DMEM medium,RPMI1640 medium以及EBM/kit均可以促进HUVEC细胞内DSCR1-1L蛋白表达升高；EBM/Kit促进HUVEC细胞增殖的效率远远高于VEGF-A165, Histamine以及二者联用；过表达DSCR1-1L可以显著促进HUVEC细胞增殖,迁移和细胞形态改变；抑制DSCR1-1L蛋白表达可以显著抑制VEGF-A165,Histamine, EBM/kit诱导的HUVEC细胞增殖,迁移和细胞形态改变；抑制TEF3蛋白表达可以显著抑制Histamine, EBM/kit诱导的HUVEC细胞增殖,迁移和细胞形态改变； 过表达YAP1可以促进HUVEC细胞增殖,迁移和细胞形态改变；抑制YAP1蛋白表达可以显著抑制VEGF-A 165,Histamine诱导的HUVEC细胞增殖,迁移和细胞形态改变：过表达YAP1可以促进DSCR1-1L蛋白表达,抑制YAP1可以抑制DSCR1-1L蛋白表达：抑制YAP1的表达可以显著抑制EBM/kit诱导的HUEC细胞增殖但不能抑制]HUVEC细胞迁移和细胞形态改变；VEGF-A165,Histamine,EBM/kit可以通过TEF3/YAP1蛋白-蛋白之间相互作用促进TEF3,YAP1/TAZ从细胞浆移位到细胞核。结论：当VEGF-A165,Histamine,EBM/kit刺激HUVEC后,YAP1去磷酸化激活并和TEF3以蛋白-蛋白之间相互作用的方式从细胞浆进入细胞核移位聚集,TEF3结合到DSCR1-1L基因启动子的M-CAT位点上,启动DSCR1-1L的基因转录,翻译成DSCR1-1L蛋白,进而发挥调节]HUVEC细胞增殖,迁移和细胞形态改变。因此DSCR1-1L是促血管生成因子下游的一个共同靶点,给抗血管生成疗法提供了一个新视角。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.5

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本文编号：2520557