乳腺癌扩增性抗原1与上皮间质转化在原发性肝癌组织的表达及其意义

发布时间：2019-09-16 10:35

【摘要】：背景乳腺癌扩增性抗原1(Amplified in Breast cancer 1,AIB1)是一种由anzick SL等于1997年在寻找乳腺癌中频繁扩增的基因时发现的基因,该基因属于p160类固醇受体转录共激活因子(steroid receptor coactivator,SRC)家族的成员。既往的研究结果发现,AIB1与其转录因子共同组成复杂的信号转导通路,不仅在机体的生长发育、新陈代谢以及内分泌调节等发面发挥着重要的作用,而且还参与了多种肿瘤细胞的发生、发展及侵袭转移等过程。EMT即上皮间质转化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT),是指上皮细胞在特定的生理和病理情况下经过一系列细胞表型或功能的改变,转变为间质细胞的现象,现在已经有研究结果显示,在生理情况下胚胎和器官的发育、创伤的修复、器官组织的纤维化都涉及到了细胞的EMT过程,在病理条件下肿瘤的侵袭转移等过程也包含有细胞的EMT过程,是肿瘤发生浸润和转移的关键步骤。本实验旨在检测并分析AIBl、上皮间质转化标记蛋白在人原发性肝癌组织及癌旁组织的表达水平,探讨其和人原发性肝癌的临床病理特征之间的关系;并用RNA干扰技术沉默肝癌细胞株HepG2中AIB1基因的表达及其对上皮间质转化标记蛋白分子表达的水平和细胞侵袭力的影响。目的本研究主要通过检测原发性肝癌患者肝癌组织及其癌旁组织中AIBl、上皮间质转化标记蛋白分子的表达水平,来进一步分析AIBl、上皮间质转化标记蛋白分子在人原发性肝癌组织的表达水平及其与临床病理特征之间的关系;采用RNA干扰技术沉默肝癌细胞株HepG2中AIB1的表达及其对EMT标记蛋白分子表达的水平和细胞侵袭力的影响。方法采用免疫组织化学法分别检测在85例原发性肝癌患者的肝癌组织及其癌旁组织AIBl、上皮间质转化标记蛋白分子紧密连接蛋白(ZO-1)、上皮样钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和神经性钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平,分析AIBl、上皮间质转化标记分子在人原发性肝癌组织的表达水平及其和临床病理特征之间相关性。把以AIBl基因为靶点的pLenti6-AIBl RNAi慢病毒载体感染肝癌细胞HepG2株后,检测肝癌细胞株HepG2中的AIBl基因的mRNA和蛋白质的表达水平,检测上皮间质转化标记蛋白分子的表达水平,并用Transwell小室实验分析其细胞的侵袭能力。结果原发性肝癌组织中AIBl、Vimentin蛋白的表达水平明显高于癌旁正常组织,E-cadherin蛋白的表达水平低于癌旁正常组织。在有淋巴结转移的原发性肝癌肿瘤组织中,AIBl高表达的发生率和未发生淋巴结转移的AIB1高表达的发生率相比差异有统计学意义(63%vs43%,P0.05),Vimentin蛋白高表达的发生率显著高于未发生淋巴结转移的Vimentin蛋白高表达的发生率(66%vs19%,P0.05),E-cadherin蛋白低表达的发生率显著高于未发生淋巴结转移的E-cadherin蛋白低表达的发生率(69%vs43%,P0.05)。在原发性肝癌组织中AIBl蛋白的表达水平与E-cadherin蛋白的表达水平呈明显负相关(r=-0.435,P0.05),而与Vimentin蛋白的表达呈正相关(r=0.358,P0.05)。用pLenti6-AIBl RNAi慢病毒载体去感染肝癌细胞株HepG2细胞后,检测细胞中AIBl mRNA的表达水平明显下降,HepG2细胞的侵袭力显著下降,E-cadherin蛋白表达水平显著上调,Vimentin蛋白表达水平显著下降。结论AIB1在肝癌组织中高表达,且与肝癌的侵袭转移有关。在肝癌细胞株HepG2中,沉默AIBl基因的表达,可使肝癌细胞HepG2中E-cadherin表达水平增加,使Vimentin表达水平下降,并可以导致细胞侵袭能力下降,提示AIB1基因可能通过诱导肝癌细胞的EMT过程来促进其侵袭转移。
【图文】：

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图 2 实时 PCR 检测 HepG2 细胞感染慢病毒 pLenti6-A照组比较，P<0.05)图 3 蛋白印迹检测 HepG2 细胞感染慢病毒 pLenti6-AP<0.05)4.4AIB1 基因对 EMT 标记分子表达的影响蛋白免疫印迹结果显示，沉默肝癌细胞株

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图 3 蛋白印迹检测 HepG2 细胞感染慢病毒 pLenti6-AIP<0.05)4.4AIB1 基因对 EMT 标记分子表达的影响蛋白免疫印迹结果显示，，沉默肝癌细胞株组 E-cadherin 蛋白的表达水平与空白对照、阴性的是，RNA 干扰组的 Vimentin 蛋白的表达和空低，差异具有统计学意义(P<0．05)，见图 4。此基因的表达后可以升高肝癌细胞株 HepG2 细胞降低 Vimentin 蛋白的表达水平。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【参考文献】