WISP2基因过表达对食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

发布时间：2019-09-21 00:14

【摘要】：目的:探讨WISP2基因过表达对食管癌细胞生物学功能的影响及可能涉及的分子机制。方法:分别构建WISP2基因过表达质粒和含空质粒载体的阴性对照组,使用Lpofectamin2000瞬时转染低分化食管癌细胞E109,利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)和蛋白印记(Western blot,WB)技术在基因及蛋白水平检测WISP2在E109-WISP2组(转染组)、E109-空质粒组(转染空质粒组)和E109-空白组(未转染WISP2质粒组)的表达;应用CCK8检测WISP2基因过表达前后细胞的增殖能力变化、Transwell小室和Matrigel基质胶检测WISP2基因过表达前后细胞侵袭、迁移能力的变化;q PCR、Western blot技术检测各组细胞ERK-1/2、Slug和E-cadherin的RNA和蛋白的表达水平的变化。结果:瞬时转染E109-WISP2组中WISP2基因m RNA表达(66.07±12.34)与E109-空质粒组(1.17±0.09)和E109-空白组相比明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),而E109-空质粒组和E109-空白组WISP2基因表达无明显差异(P0.05);E109-WISP2组中WISP2蛋白表达水平与E109-空质粒组及E109-空白组相比明显升高,和两对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。CCK8法检测结果显示E109-WISP2组(0.225±0.003)与E109-空质粒组(0.26±0.003)及E109-空白组(0.26±0.001)相比增殖能力明显降低,和两对照组相比差异有统计学意义(P0.05),而E109-空质粒组和E109-空白组无明显差异(P0.05);Transwell小室侵袭实验显示WISP2过表达后食管癌细胞穿透Matrigel基质胶的细胞数(26.60±4.81),显著低于E109-空质粒组(53.20±4.32)及E109-空白组(56.00±4.90),差异具有统计学意义(P0.05);而E109-空质粒组和E109-空白组相比无明显差异(P0.05)。Transwell小室迁移实验显示WISP2过表达后癌细胞通过聚碳酸酯微孔滤膜的细胞数(55.20±4.52),显著低于E109-空质粒组(95.5±4.79)及E109-空白组(99.60±5.78),差异具有统计学意义(P0.05);而E109-空质粒组和E109-空白组相比无明显差异(P0.05)。q PCR及Western blot检测结果显示E109-WISP2组细胞与E109-空质粒组和E109-空白组相比,ERK-1/2、Slug表达降低,而E-cadherin表达升高。结论:WISP2基因的过表达能明显降低食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力;WISP2基因过表达能降低ERK-1/2、Slug的表达及提高E-cadherin的表达;WISP2基因可能通过调节ERK1/2的表达抑制食管癌细胞的增殖能力;通过调节Slug和E-cadherin的表达抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1

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本文编号：2539083