miR-let-7d通过调控核受体PPARγ促进肺癌细胞的增殖和侵袭

发布时间：2019-09-22 09:34

【摘要】：目的:探讨miR-let-7d对肺癌细胞核受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的调控及对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:用生物信息学分析与PPARγ相关的microRNA,通过质粒报告基因验证miR-let-7d的作用靶点;利用Western blot法筛选出PPARγ表达水平低的肺癌细胞株;通过双萤光素酶标记和Western blot法验证miR-let-7d对肺癌细胞中PPARγ表达的调控作用;通过集落形成实验检测miR-let-7d对肺癌细胞增殖能力的调控作用;通过Transwell侵袭实验检测miR-let-7d对肺癌细胞侵袭能力的作用。结果:生物信息学的分析结果证明miR-let-7d可以调控核受体PPARγ的蛋白表达;在核受体PPARγ的3’UTR包含2个功能性的miR-let-7d结合位点;PPARγ是miR-let-7d的直接靶点,miR-let-7d可在蛋白和mRNA水平直接调控PPARγ的表达;miR-let-7d inhibitor通过升高PPARγ的表达促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力。结论:miR-let-7d能够通过靶向增加具有抑癌作用的核受体PPARγ的表达水平,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力。
【图文】：

miＲanda［16］)对其进行了分析预测。分析结果发现以下的4条mircoＲNA:hsa-miＲ-125b、hsa-miＲ-37、hsa-miＲ-135a和hsa-miＲ-let-7d在3种软件的评分系统中均获得了较高分值，极具与PPAＲγ3’-UTＲ发生功能性结合的潜力，因而用于后续研究。运用Westernblot技术检测4条microＲNA(hsa-miＲ-125b、hsa-miＲ-37、hsa-miＲ-135a和hsa-miＲ-let-7d)对PPAＲγ表达水平的影响。将以上microＲNAmimic转染肺癌细胞株A549，，结果显示只有hsa-miＲ-let-7d能够显著抑制PPAＲγ蛋白的表达，见图1。Figure1．TheeffectsofmicroＲNAmimictransfectionontheproteinexpressionofPPAＲγintheA549cells．Mean±SD．n=10．图1不同micromＲNAmimic转染对A549细胞PPAＲγ蛋白表达的影响2核受体PPAＲγ的3’-UTＲ包含2个功能性miＲ-let-7d结合位点生物信息学的分析结果显示，在PPAＲγ的3’-UTＲ有2个潜在的miＲ-let-7d结合位点，暂将其命名为位点A和位点B。使用PPAＲγ质粒报告基因活性分析进一步鉴定这2个结合位点的功能，显示miＲ-let-7d能显著降低含野生型全长PPAＲγ3’-UTＲ报告基因的转录活性，而其中任意一个识别位点的缺失都在一定程度上削弱miＲ-let-7d对报告基因活性的抑制作用，结果如图2所示。当位点B缺失时，miＲ-let-7d对报告基因的抑制率从57%降低到35%左右;当位点A缺失时，抑制率从57%下降到18%;如果2个位点都缺失，miＲ-let-7d不再对报告基因的活性产生任何影响。这提示3’-UTＲ同时拥有2个功能性的miＲ-let-7d识别位点，虽然两者与miＲ-let-7d的亲和力具有差别(位点A在miＲ-let-7d介导的报告基因活性抑制中起着主要作用)，但两者能以效应叠加的方式共同介导miＲ-let-7d对含PPAＲγ3’-UTＲ的报告基因活性的抑制。Figure2．Ｒ

Figure3．TheexpressionofPPAＲγindifferentlungcancercelllines．Mean±SD．n=10．图3不同肺癌细胞株中PPAＲγ的表达情况Figure4．TheregulatoryeffectsofmiＲ-let-7donPPAＲγexpressioninthelungcancercells．A:miＲ-let-7dmimicdown-regulatedthemＲNAandproteinexpressionofPPAＲγ;B:miＲ-let-7dinhibitorup-regulatedthemＲNAandproteinexpressionofPPAＲγ;C:dualluciferase-labeledPPAＲγwasadirecttargetofmiＲ-let-7d;D:miＲ-let-7ddidnotregulatetheexpressionlevelofPPAＲα．Mean±SD．n=10．*P＜0.05vsNC．图4miＲ-let-7d对肺癌细胞中PPAＲγ表达的调控作用Figure5．KnockdownofmiＲ-let-7dexpressioninhibitedlungcancercellproliferation(×40)．Mean±SD．n=10．*P＜0.05vsNC．图5敲减miＲ-let-7d的表达可以抑制肺癌细胞的增殖·702·
【作者单位】： 新乡医学院基础医学院病理学教研室;新乡医学院基础医学院形态学实验室;新乡医学院第一附属医院病理科;
【基金】：新乡医学院博士科研启动基金资助项目(No.505079) 新乡医学院第一附属医院博士科研启动基金资助项目(No.xyyfy2015BS-006)
【分类号】：R734.2

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本文编号：2539900