FGGY在胃癌中作用的初步探讨

发布时间：2019-09-23 09:36

【摘要】：背景与目的据报道2012年全球癌症约新发1410万例和死亡820万例,其中胃癌发病率位居所有癌症的第五位,死亡率则高居第三位。目前国际通行的胃癌诊疗方案为以手术切除为主的综合性治疗。有学者认为,进展期胃癌强调增加清扫范围、联合脏器切除等手术方式无法给患者带来更多益处。而对于进展期患者传统的手术治疗及放化疗等方法疗效欠佳,患者5年生存率仍低于30%。故寻求包括肿瘤基因治疗在内的新的有确切疗效的胃癌诊疗方案成为当务之急。研究证实,恶性肿瘤的发生、发展与抑癌基因的失活具有非常密切的关系。通过生物学技术及原理,将目的基因导入到目标恶性肿瘤细胞内,以实现对恶性肿瘤细胞抑癌基因突变或缺失的逆转,达到肿瘤患者带瘤生存期的延长甚至临床痊愈,这为临床肿瘤治疗提供了新的方法和希望。本文将通过慢病毒感染技术、Western blot、软琼脂克隆形成试验等方法检测FGGY是否为候选胃癌特异性抑癌基因。一、检测不同细胞系中FGGY蛋白的表达差异方法1、Western blot检测胃正常黏膜细胞及其他来源正常细胞系中FGGY蛋白的表达差异2、Western blot检测胃正常黏膜细胞及胃癌细胞系中FGGY蛋白的表达差异结果1、Western blot检测胃正常黏膜细胞及其他正常细胞系中FGGY蛋白的表达差异Western blot结果显示:GES-1、JB6、Ha Ca T、HIEC、CCD-18Co细胞系中FGGY蛋白呈高表达。2、Western blot检测胃正常黏膜细胞及胃癌细胞系中FGGY蛋白的表达差异Western blot检测结果提示:SGC7901、BGC803、MGC823、HGC27细胞系中FGGY蛋白呈低表达或不表达。二、上调FGGY的表达对胃癌细胞生长的影响方法1、构建p CMV-FGGY过表达载体,送上海生工测序验证。2、将p CMV-FGGY质粒转染低表达或不表达胃癌细胞株,以转染p CMV-Mock为对照组,Western blot检测转染后FGGY蛋白过表达效率。3、软琼脂克隆形成试验检测过表达FGGY对胃癌细胞非锚定生长能力的影响。每种胃癌细胞均分为2组:p CMV-Mock组,p CMV-FGGY组,细胞培养箱中培养7-14天,镜下观察细胞克隆的大小及数目的变化。结果1、胃癌细胞转染p CMV-FGGY后,FGGY蛋白表达量显著升高。2、发现过表达FGGY显著抑制癌细胞的非锚定生长,克隆形成数显著减少。三、沉默基因FGGY对EGF诱导的正常细胞转化的影响方法1、设计FGGY sh RNA引物,做PCR得到片段,克隆到plko构建FGGYsh RNA表达载体。2、将FGGY sh RNA表达载体通过慢病毒颗粒shmock和sh FGGY感染JB6细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立FGGY沉默稳定细胞株,Western blot检测基因沉默后FGGY蛋白水平的变化。3、软琼脂克隆形成试验检测基因沉默FGGY对EGF诱导的细胞转化的影响。结果1、基因沉默后,JB6细胞FGGY蛋白表达量显著降低。2、发现下调FGGY显著增强EGF诱导的细胞转化,克隆形成时间提前,数量显著增多,直径显著增大。结论1、细胞实验证实FGGY基因抑制胃癌细胞的增殖,并对其侵袭、迁移能力有抑制作用。2、FGGY基因为一潜在抑癌基因,在胃癌的发生发展中有调节抑制作用,可能成为胃癌基因治疗的一个潜在靶点。
【图文】：

不同来源,避光,黏膜,细胞系

第一章检测不同细胞系中 FGGY 蛋白的表达差异避光条件下孵育 2-5min，利用凝胶成像分析仪获取图像。2 实验结果2.1 不同来源的正常细胞系内 FGGY 蛋白的表达Western blot 结果表明（图 1-1）FGGY 蛋白在胃正常黏膜细胞以及其他来源的正常细胞内存在 FGGY 蛋白的表达。用 Image J 软件进行各细胞间的条带灰度值扫描后，结果显示各种细胞内 FGGY 的表达存在差异。

胃癌细胞系

灰度值扫描后，结果显示各种细胞内 FGGY 的表达存在差异。图 1-1 不同来源正常细胞系内 FGGY 蛋白的表达2.2 胃正常及胃癌细胞系内 FGGY 蛋白的表达Western blot 结果表明（图 1-2）FGGY 蛋白在胃正常黏膜细胞内存在 FGGY蛋白的表达且呈高表达状态，但不同来源的胃癌细胞系呈低表达或不表达状态。用 Image J 软件进行各细胞条带灰度值扫描后，对比各组得出绝对值较明显的倍数差异,提示 FGGY 蛋白的缺失可能导致细胞增殖异常，出现恶性增殖进而导致胃癌的发生，，并且具有良好的器官特异性。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

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