P53通过促进miR-145的表达抑制肺腺癌A549细胞的干细胞特性

发布时间：2019-09-25 09:32

【摘要】：目的:探讨P53抑制肺腺癌A549细胞干细胞特性及其机制。方法:收集2014年3月至2015年12月解放军第85医院胸外科手术切除的30例非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者癌组织及癌旁组织,采用Real-time PCR检测NSCLC组织和癌旁组织中miR-145的表达。构建人P53基因的真核表达载体(pcDNA3.1-P53)和突变载体[pcDNA3.1-P53R273H(CGT-CAT)],设计靶向P53基因的siRNA,分别转染A549细胞;细胞分为对照转染组(Vector或NCsiRNA)和实验组(Flag-P53或P53-siRNA);Western blotting检测P53蛋白过表达和干扰效率,Real-time PCR检测OCT4和miR-145的表达,荧光双报告基因和Western blotting技术检测证实A549细胞中干细胞多能性调节基因(OCT4)为miR-145的靶标分子。结果:NSCLC组织中miR-145的表达水平明显低于癌旁组织[(2.31±0.13)vs(3.51±0.27),P0.01];P53明显促进A549细胞中miR-145的表达[(1.84±0.14)vs(1.00±0.00),P0.01];miR-145 mimics显著抑制A549细胞中pGL3-OCT4-3′-UTR活性(P0.01)和OCT4蛋白表达水平(P0.05),而转染miR-145抑制剂可进一步增加OCT4表达水平,且逆转P53对A549细胞的干细胞特性的抑制作用。结论:P53通过促进miR-145表达下调OCT4表达,进而明显抑制A549细胞的干细胞特性,该结果为肺腺癌的临床诊断和治疗提供了新途径。
【图文】：

１４５识别位点序列ＡＡＣＴＧＧ突变为ＴＴＧＡＣＣ邋）。逦＃邋＃逡逑ＰＣＲ邋扩增引物：ＯＣＴ４－ＵＴＲ－Ｋｐｎ邋Ｉ：邋５＇－ｃ卿ｇｔａｃｃ邋ＧＧＴ－邋２．邋１逦Ｐ５３邋抑制邋Ａ５４９邋细胞邋ＯＣ７￥邋和邋Ｓｏ％２邋ｍＲＮＡ邋表达逡逑ＧＣＣＴＧＣＣＣＴＴＣＴＡＧＧＡＡＴＧ－３＇和邋ＯＣＴ４－ＵＴＲ－ＪＳ７ｉｏ邋Ｉ邋：逦Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ（图邋１Ａ）和邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ邋检测逡逑５邋＾－ｃｃｇｃｔｃｇａｇ邋ＴＡＡＧＴＧＴＧＴＣＴＡＴＣＴＡＣＴＧＴＧ－３＇；引物逦结果（图１Ｂ）显示，Ａ５４９细胞中过表达尸５３蛋白后逡逑０ＣＴ４（ｍｕ）邋３邋（－ＵＴＲ，邋Ｆ邋：５１邋－ＧＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＧＣＴＴＧＡＣ－逦ｍＲＮＡ邋和邋Ｓｏ：＊２邋ｍＲＮＡ邋表达水平较空载体转染逡逑ＣＴＴＧＧＡＧＧＧＡＡＧＧＴＧＡ－３，和邋Ｒ：邋５，－ＴＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴ逦组（Ｖｅｃｔｏｒ）显著降低［（０＿邋４９邋±邋０？邋０７）和（０．邋７１邋±逡逑ＣＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＣＣＴ－３’。逦０．邋０６）邋ｗ邋（１．００邋±邋０．邋００），均邋Ｐ邋＜邋０．邋０１邋］。与对照组逡逑２９３Ｔ细胞报告基因检测实验分组：（１）对照组：逦ＮＣ－ｓｉＲＮＡ相比，转染ｓｉＲＮＡ抑制Ｐ５３邋ｍＲＮＡ水平逡逑ｖｅｃｔｏｒ（转染报告载体ｐＧＬ３－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ邋Ｒｅｐｏｒｔｅｒ空载邋后，ＯＣＴ４和Ｓｏａ：２邋ｍＲＮＡ的表达水平显著升高逡逑体、内参载体邋ｐＲＬ－ＴＫ邋和邋Ｃｔｒｌ－ｍｉｍｉｃｓ邋或邋ｍｉＲ１４５－ｍｉｍ－邋［邋（３．邋９９邋±０．３８）和（２．邋３６邋±０．２１）逦（１．００邋±０．００），逡逑ｉｃｓ）邋；邋（２）实验组：ＯＣ

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【作者单位】： 解放军第85医院肺科;
【分类号】：R734.2

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本文编号：2541372