ERp29与肺癌吉西他滨化疗敏感性的相关性及其机制研究

发布时间：2019-09-25 11:30

【摘要】：背景和目的肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。内质网蛋白29(endoplasmic reticulumprotein29,ERp29)定位于内质网,在多种肿瘤中表达异常。ERp29表达与肿瘤分化程度、复发及预后相关。但是ERp29在肺癌的作用鲜有报道。有报道显示ERp29与肿瘤细胞放化疗敏感性相关。蛋白组学研究发现吉西他滨耐药的胰腺癌细胞表达ERp29前体明显增高。因此推测ERp29可能与吉西他滨化疗敏感性相关。本研究旨在检测肺癌患者ERp29的表达,分析ERp29表达与肺癌患者临床病理特征的相关性,观察ERp29基因沉默对肺癌细胞增殖、迁移和吉西他滨化疗敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法Western blot方法检测20例肺癌标本及其匹配的癌旁组织ERp29的表达。免疫组化检测75例肺腺癌患者ERp29的表达,分析ERp29表达与肺腺癌患者临床病理特征(包括年龄、性别、T分期、TNM分期、肿瘤的分化程度和淋巴结转移)的相关性。应用siRNA方法下调两种肺腺癌细胞株(A549和SPC-A1细胞)ERp29的表达。采用CCK-8法,分析ERp29 siRNA对A549和SPC-A1细胞体外增殖的影响。划痕实验和Transwell实验检测ERp29 siRNA对肺癌细胞迁移的影响。不同浓度的吉西他滨作用A549和SPC-A1细胞,采用SPSS 13.0软件计算吉西他滨对细胞的半数抑制浓度(IC50)。CCK-8法检测ERp29 siRNA对肺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。不同浓度的吉西他滨作用A549和SPC-A1细胞,Western blot方法检测细胞ERp29表达。检测吉西他滨联合ERp29 siRNA对细胞凋亡和细胞周期的影响。Western blot方法检测吉西他滨联合ERp29 siRNA对细胞HSP27表达的影响。CCK-8法检测HSP27 siRNA对肺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响。结果Western blot检测结果显示20例患者肺癌组织ERp29表达明显高于癌旁组织,P0.05。免疫组化检测结果显示75例患者肺腺癌组织ERp29高表达率为73%(55/75),癌旁组织为1%(1/75),两者差异有统计学意义(χ2=83.093,P0.01)。ERp29表达与肺腺癌患者年龄、性别、T分期、TNM分期、肿瘤的分化程度和淋巴结转移均无明显相关(P0.05)。与对照siRNA相比,ERp29 siRNA明显下调A549和SPC-A1细胞ERp29蛋白表达。ERp29基因沉默对A549和SPC-A1细胞体外增殖无明显影响。划痕实验和Transwell实验显示ERp29基因沉默明显抑制肺癌细胞迁移。吉西他滨对A549和SPC-A1细胞的IC50分别是0.51±0.06μM和4.29±0.20μM。转染ERp29siRNA后,吉西他滨对A549和SPC-A1细胞增殖的抑制作用增强,细胞对吉西他滨的敏感性增加。不同浓度的吉西他滨作用肺癌细胞后,细胞ERp29表达增加。20μM吉西他滨作用A549细胞后,细胞凋亡率由6.43±0.55%增加至20.9±2.83%,吉西他滨和ERp29siRNA联合应用将细胞凋亡率提高至30.8±1.41%。50μM吉西他滨作用SPC-A1细胞后,细胞凋亡率由6.1±1.12%增加至19.82±1.76%,吉西他滨和ERp29siRNA联合应用将细胞凋亡率提高至27.53±1.11%。吉西他滨联合ERp29 siRNA协同增加肺癌细胞磷酸化HSP27与总HSP27比值。转染HSP27 siRNA后,肺癌细胞HSP27表达明显下调,吉西他滨对细胞的抗肿瘤作用减弱,细胞对吉西他滨的敏感性降低。结论肺癌组织ERp29表达明显高于癌旁组织。ERp29基因沉默明显增加吉西他滨的细胞增殖抑制率,增加吉西他滨诱导的细胞凋亡,提高肺癌细胞对吉西他滨的敏感性。ERp29可能通过调节磷酸化HSP27,影响肺癌细胞对吉西他滨的敏感性。ERp29有望成为治疗肺癌的新靶点。
【图文】：

逡逑２．２．２肺腺癌患者ＥＲｐ２９表达逡逑如图１－２所示，ＥＲｐ２９阳性表达定位于细胞浆。肺癌纽织ＥＲｐ巧高表达率为逡逑７３％（５５／７５），癌旁组织仅为１％（１／７５），，两者差异有统计学意义（／＝８３．０９３，尸＜０．０１）。逡逑私；？八哪’’节产二４逡逑一－＇游、逦一－之逡逑＇．冷．逦＞逡逑囼逦公．．．．今采’逦４逦■■逡逑、妥－＼逦ｔ邋．＂’Ｉ逦}B处多＊逡逑ｊ邋＇邋２Ｐ０ｉｉｍ逦Ｉ邋。邋ｉ邋邋１Ｇ０ｕｍ逦ｊ：！；，＇．

本文编号：2541415