原钙粘蛋白CDHR2在肝癌中的表达及其功能研究

发布时间：2019-10-04 03:23

【摘要】：肝癌是目前临床上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年增高,与之而来的是肝癌的死亡率也在不断升高。2012年全球因肝癌导致的死亡人数达到745000人,是恶性肿瘤致死的重要原因。我国的肝癌死亡率高居各种肿瘤的第二位。这主要是由于肝癌起病隐匿,发现时已至中晚期,且治疗肝癌的主要方法仍为手术治疗、局部消融、肝动脉栓塞化疗、放疗、系统化疗以及传统中药治疗等,疗效不尽如人意。因此迫切需要阐明肝癌的发病机制,挖掘有价值的早期诊断以及治疗的生物靶标。CDHR2属于钙粘蛋白超家族中原钙粘蛋白超家族中的一员,由于其主要表达于人的肝、肾、以及结直肠等组织器官中,最初被命名为PCDH LKC(原钙粘蛋白LKC)。CDHR2蛋白由1310个氨基酸组成,在结构上包括7个钙粘蛋白重复结构域,1个跨膜区和PDZ结合域。原钙粘蛋白是一种带有亲同种抗原结合活性的跨膜蛋白,它们主要由几个到110个胞外段钙粘蛋白重复序列组成的。以往的研究表明原钙粘蛋白的表达水平与细胞增殖紧密相关。由基因突变引起的原钙粘蛋白表达水平的下调或者其功能的改变可导致肿瘤的发生,促进肿瘤的侵袭和转移,表明原钙粘蛋白与肿瘤的发生发展密切相关。CDHR2作为原钙粘蛋白超家族中的一员,也具有相似的特性。研究发现,在结直肠癌细胞中CDHR2通过改变β-catenin的分布来介导细胞接触抑制的发生,从而抑制肿瘤细胞生长和增殖,表明CDHR2在结直肠癌的发生发展中具有重要作用。而CDHR2在肝癌中表达及作用还未见相关报道。我们在前期研究中,通过基因芯片技术筛选发现,与癌旁组织相比,CDHR2在肝癌组织中的表达显著下调。本课题中我们分析了CDHR2在肝癌中的表达和调控机制,探讨CDHR2在肝癌细胞中的生物学功能及其作用的分子机制。首先通过半定量PCR的方法和Western-blot的方法检测CDHR2在多种肝癌细胞中的mRNA和蛋白的表达水平。构建携带CDHR2的慢病毒表达系统,感染CDHR2低表达或缺失的肝癌细胞,通过细胞倍增、EDU的掺入、平板克隆、以及平板软琼脂克隆形成等实验,分析CDHR2的过表达对肝癌细胞的增殖能力、克隆形成能力和非锚着依赖性生长能力的影响。通过裸鼠体内移植瘤模型检测CDHR2对肝癌细胞体内成瘤能力的影响。通过高通量蛋白芯片检测技术探讨肝癌细胞中CDHR2的表达对细胞信号通路的改变情况,并进行了初步的验证。通过甲基化水平的检测分析肝癌细胞中CDHR2的低表达是否与表观遗传学调控有关。设计CDHR2特异性多肽制备了兔多克隆抗体用于Western blot和免疫组化实验。收集临床肝癌组织标本,进行半定量PCR和免疫组化实验,检测肝癌组织标本中CDHR2的表达情况。我们的研究结果发现CDHR2在多种肝癌细胞中表达下调或者缺失。在低表达CDHR2的肝癌细胞系smmc-7721和PLC/PRF/5中,过表达CDHR2可以抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成和非锚着依赖性生长的能力;且具有抑制肝癌细胞体内成瘤能力的作用。在机制研究中我们发现CDHR2可抑制Akt的磷酸化,下调COX-2的表达,从而发挥其抑制肝癌细胞增殖的作用;通过转染激活型Akt,可逆转CDHR2下调COX-2的表达及其抑制肝癌细胞增殖的作用。表观遗传学研究发现肝癌细胞中CDHR2的低表达部分与其启动子区CpG岛的甲基化有关。在临床肝癌组织标本检测中发现CDHR2的mRNA和蛋白水平在肝癌组织中均呈现一个普遍表达下调或缺失的状态。我们的结果首次阐明了CDHR2在肝癌中呈表达下调或缺失,过表达CDHR2可通过Akt信号通路介导肝癌细胞的增殖抑制,从而抑制了肝癌细胞的生长,揭示了一种新的肝癌发生发展的调控机制。
【图文】：

体重。根据公式 V=ab2/2 来计算肿瘤的变化。其中 a 为长的直径，b 为短的直径。（五）统计学的分析及检验本实验所有的实验结果均采用软件 SPSS19.0 进行统计学分析。对照组和实验组均采用 t 检验对其均数进行比较。三、实验结果（一）CDHR2 在肝癌细胞系中的表达本实验中，我们对 7 种肝癌细胞中的 CDHR2 的表达情况进行半定量 RT-PCR 的检测。结果显示（图 1-1），在所检测的 7 种肝癌细胞系中，smmc-7721、HepG3B、PLC/PRF/5、Huh7、HCC-LM3 细胞中的 CDHR2 含量缺失或明显减少，，而 HepG2 细胞呈高表达的状态，提示 CDHR2 基因在肝癌细胞中呈普遍下调。

原钙粘蛋白 CDHR2 在肝癌中的表达及其功能的随后，我们提取 7 种肝癌细胞的总蛋白进行 Western blot 检测，发现与半定-PCR 检测的结果基本一致，smmc-7721、PLC/PRF/5、Huh7、HCC-LM3HCC-97L 细胞中 CDHR2 的蛋白表达下调，而 Hep3B 表达缺失，HepG2 中呈高（图 1-2）。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 迟宁;喝咖啡可降低肝癌的发病率[J];日本医学介绍;2005年05期

2 吴孟超;;肝癌外科治疗的近期进展[J];中国普外基础与临床杂志;2006年02期

3 张志敏;;肝癌会遗传吗?[J];肝博士;2006年03期

4 徐连根;周晶;雷伟;沈志祥;;瘦素及其受体在肝癌组织中的表达及意义[J];胃肠病学和肝病学杂志;2006年05期

5 魏丽珍;李胜棉;张楠;温登瑰;周烨;王士杰;;688例肝癌患者发病特点及诊疗状况分析[J];肝脏;2010年02期

6 ;我国科研人员发现促进肝癌生长和转移的相关基因[J];临床荟萃;2010年10期

7 吴生;;盘点诱发肝癌的7大元凶[J];肝博士;2012年01期

8 邓庆华;一家四例肝癌报道[J];中国厂矿医学;1995年06期

9 王定珠;;觥筹交错 过度疲劳 肝癌乘机而入[J];健康博览;2005年11期

10 笑山,吴蓉蓉;喝咖啡可以减少肝癌发生率[J];健康之路;2005年04期

相关会议论文 前10条

1 俞顺章;穆丽娜;;饮水中藻类毒素与肝癌关系和控制的研究(摘要)[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2007年

2 杨秉辉;;肝癌预防的新话题-非酒精性脂肪性肝病与肝癌[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

3 丁光伟;杨玉秀;徐秋霞;徐存拴;;肝癌多基因表达异常初步研究[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

4 吴孟超;;肝癌外科治疗的近期进展[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集（上册）[C];2007年

5 刘耕陶;孙华北;方亚南;;肝癌发生的化学预防[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

6 阮秀花;田葱;张效本;张喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病学分析[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

7 阮秀花;田葱;张效本;张喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病学分析[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

8 吕岩;韩学锋;;肝癌患者需求的评估[A];中华医学会医学工程学分会第八次学术年会暨《医疗设备信息》创刊20周年庆祝会论文集[C];2006年

9 孙华;魏怀玲;刘耕陶;;双环醇对化学毒物促发肝癌的防治作用及作用机制研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年

10 谢静媛;戴炜;涂爱民;赵文高;符花;胡应龙;;深圳地区53例肝癌发生的相关因素探讨[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 湖北宜昌 胡献国;吸烟与肝癌[N];上海中医药报;2013年

2 四川成都 孙清廉;远离肝癌 谨防四大危险因素[N];上海中医药报;2013年

3 特约撰稿 北京朝阳医院京西院区肝胆外科主任 孙文兵;警惕肝癌的过度治疗[N];医药导报;2007年

4 健康时报特约记者 孙理;三招不得肝癌[N];健康时报;2008年

5 叶建平;专家提醒肝癌患者保护生命 重在“三早”防治[N];中国中医药报;2008年

6 通讯员 韦夏 本报记者 邓宏鹰 钟少鸿;不良饮食习惯易诱发肝癌[N];中国食品报;2009年

7 记者 顾泳;我国肝癌患者占全球55%[N];解放日报;2010年

8 解放军302医院 刘士敬;四成肝癌酒精泡出来的[N];健康时报;2010年

9 记者 颜维琦 曹继军;我科学家揭示肝癌发生早期分子机制[N];光明日报;2012年

10 记者 胡德荣;肝癌发生早期阶段分子机制被揭示[N];健康报;2012年

相关博士学位论文 前10条

1 陈放;TOPK蛋白和肝癌发生以及相关调控机制的研究[D];复旦大学;2011年

2 张怡安;中枢神经特异性RNA结合蛋白NOVA1在肝癌中的表达及其促进肿瘤发展的潜在分子机制探究[D];复旦大学;2014年

3 殷杰;E3泛素连接酶Prp19对肝癌侵袭的影响及其机制研究[D];复旦大学;2014年

4 周宇红;分化抑制因子ID1在调控化疗诱导的肝癌细胞“干性”改变中的作用研究[D];复旦大学;2014年

5 王盛;FOXA1基因变异和调控异常促

本文编号：2545717