饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响
【图文】：
670解放军医学杂志2017年8月1日第42卷第8期2结果2.1硬脂酸和DHA对A549细胞增殖的影响克隆平板经扫描后的图片如图1A(a)所示，可见随硬脂酸或DHA浓度的增加，细胞克隆数逐渐减少；图1A(b)为细胞克隆数的统计分析结果，可见30、60、120、240μmol/L硬脂酸处理组和60、120、240μmol/LDHA处理组与各自的空白对照组相比，细胞克隆数均明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。第5天细胞增殖实验结果见图1B，120、240μmol/L硬脂酸作用A549细胞的第1、2、3、4、5天细胞增殖与空白对照组相比明显减少，60μmol/L硬脂酸作用A549细胞后第4、5天与空白对照组相比细胞增殖明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)，其他处理组与空白对照组相比细胞增殖差异无统计学意义。120、240μmol/LDHA作用于A549细胞第1、2、3、4、5天与空白对照组相比细胞增殖明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)，60μmol/LDHA作用A549细胞第4、5天与空白对照组相比细胞增殖明显减少，该变化与硬脂酸处理组一致，30μmol/LDHA作用A549细胞第5天与空白对照组相比细胞增殖明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。从总体水平上看，硬脂酸、DHA都有抑制A549细胞增殖的作用。2.2硬脂酸、DHA诱导A549自噬荧光由图2可见，120μmol/L硬脂酸、DHA分别作用稳定感染RFP-GFP-LC3慢病毒的A549细胞24h，用激光扫描共聚焦显微镜观察可见红色荧光和绿色荧光。在自噬发生初期，LC3Ⅰ会酶解一段多肽，转变成LC3Ⅱ，并引导RFP-GFP-LC3慢病毒聚集到自噬体上，在共聚焦显微镜下即可观察到绿色、红色荧光聚集点。随着自噬的发生发展，，在自噬后期，pH值降低，绿色荧光变暗甚至淬灭，红色荧光保持稳定不变。由图2所见，用共聚焦显微镜放大1890倍后，与空白对照组相比，硬脂酸、DHA处理组绿色?
MedJChinPLA,Vol.42,No.8,August1,20176712.3硬脂酸、DHA诱导A549自噬相关蛋白的表达在细胞发生自噬时，LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的含量在一定程度上能反映细胞自噬的形成。120μmol/L硬脂酸、DHA分别诱导A549细胞12、24、36h后，Westernblotting检测结果(图3A)显示，与空白对照组比较，硬脂酸处理组(图3A)和DHA处理组(图3B)在12、24、36h时点LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高，p-mTOR(ser2448)蛋白表达无变化，mTOR(ser2481)磷酸化均受到抑制，差异有统计学意义(P<0.01)。在相同条件下，硬脂酸和DHA处理A549细胞后，细胞自噬相关蛋白表达变化趋势一致。3讨论目前已有大量文献报道不饱和脂肪酸DHA有抗肿瘤的作用，摄入DHA能降低乳腺癌[5-7]、结肠癌[8]、前列腺癌和肾癌[9]的发病风险。但有关饱和脂肪酸及不饱和脂肪酸对肺癌细胞影响的差异报道较少，图2硬脂酸和DHA作用于A549细胞产生的自噬荧光Fig.2TheautophagyfluorescenceimageofA549exposedtostearicacidandDHArespectivelyControlSolventcontrolStearicacidDHAGFPRFPOverlay图3硬脂酸、DHA分别诱导A549自噬的相关蛋白变化Fig.3Changesintheexpressionofautophagy-relatedproteininA549cellsinducedbystearicacidandDHATheexpressionsofLC3Ⅰ,LC3Ⅱ,p-mTOR(ser2448)andp-mTOR(ser2481)inA549cellsexposedtostearicacid(A)orDHA(B)ataconcentrationof120μmol/Lfor12,24and36hours.(1)P<0.01comparedwiththecontrolgroup(n=3)LC3ⅠLC3Ⅱp-mTOR(ser2448)p-mTOR(ser2481)GAPDHL3CⅡL/3CⅠ1.51.00.50(1)(1)(1)p-mTRO(se2481)/GrADHP0.80.60.40.20(1)(1)(1)LC3ⅠLC3Ⅱp-mTOR(ser2448)p-mTOR(se
【作者单位】： 广东医科大学生物化学与分子生物学教研室;广东医科大学附属医院呼吸内科;
【基金】：国家自然科学基金(81273549) 广东省科技计划项目(2014A020212292)~~
【分类号】：R734.2
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