食管鳞状细胞癌USP22和Ku80表达的基础研究及相关临床意义

发布时间：2019-10-23 08:29

【摘要】：研究目的:食管癌(Esophageal Carcinoma)是全世界最常见的恶性肿瘤之一。食管癌高发区集中在亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家。我国是食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)高发地区,国外以食管腺癌为主。近年来,随着食管癌多学科治疗广泛开展及应用,出现了基于食管鳞癌方面的免疫治疗如PD-L1的随机、平行、多中心3期临床研究,食管癌诊疗水平逐步提高,但食管癌高复发及高转移率,目前5年总生存率仅20%-30%。由于ESCC的肿瘤异质性,淋巴结状态、肿瘤分化、病理分期等传统预后因素不能很好预测食管癌复发、转移风险,探索肿瘤预后有效预测标志物亟待解决,以确定高复发和高转移食管癌的不同亚组,指导个体化治疗策略和优化食管癌治疗,以利提高食管癌患者的生存期。泛素特异性蛋白酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在多种恶性肿瘤中高表达,与肿瘤复发及转移密切相关。Ku80为DNA结合蛋白,与DNA末端及与DNA损伤双链DNA断裂(DSBs)相结合。Ku80与DSBs非同源末端结合(NHEJ)修复途径密切相关,参与维持染色体端粒稳定、细胞增殖、凋亡及信号转导机制。本研究通过分析食管癌细胞株及癌组织USP22和Ku80蛋白表达状态,探讨USP22与Ku80表达相关性并分析二者间相互调控对食管鳞癌发生发展的作用,评价USP22-Ku80表达模型作为ESCC患者诊断、预后及治疗分子表型意义,为ESCC诊疗提供新思路。研究方法:1.USP22和Ku80在食管鳞癌细胞株中表达免疫荧光检测ECA109食管癌细胞和Ku80(病毒转染后)过表达ECA109细胞中USP22和Ku80蛋白表达状态。Western blotting检测食管鳞癌细胞系ECA109细胞和Ku80过表达ECA109细胞中USP22和Ku80蛋白表达水平。2.USP22和Ku80在食管鳞癌患者肿瘤组织中的表达回顾性研究2010年1月到2010年12月山东大学附属省立医院胸外科食管癌切除术有完整随访资料80例食管鳞癌患者。男性58例,女性22例。ESCC病理标本采用免疫组织化学染色方法(immunohistochemistry,IHC)检测肿瘤组织USP22和Ku80蛋白表达。3.统计分析研究结果肿瘤患者蛋白表达水平与临床病理学特征的关系用χ2检验、Western blotting所测两组蛋白表达定量比较应用t检验,术后生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank检验分析,连续型变量采用均值±标准差描述,二分类变量采用率和百分比描述,采用卡方检验比较组间是否有统计学差异,单因素及多因素的变量分析采用COX回归分析。研究结果:1.USP22和Ku80在食管癌细胞株中表达USP22和Ku80免疫阳性反应均呈红色荧光,且定位于细胞核,overlap发现ECA109 Ku80过表达细胞中USP22蛋白表达高于食管癌细胞系ECA109细胞系中表达水平。ECA109 Ku80过表达细胞株中,Western blotting蛋白定量其Ku80过表达同时USP22蛋白表达明显高于ECA109细胞USP22表达水平(P0.05)。2.USP22和Ku80在食管鳞癌患者癌组织中表达USP22蛋白和Ku80蛋白阳性表达产物表现为肿瘤细胞核内棕黄色颗粒。80例ESCC患者分USP22阳性51例和阴性29例,Ku80阳性55例和阴性25例。Ku80与USP22均阳性表达为44例,两者表达呈正相关(r=0.501,P0.001)。USP22高表达状态与肿瘤分化、T分期(P=0.008,P=0.005)显著相关,Ku80表达与肿瘤的分化、T分期显著相关(P=0.010,P=0.008)。单因素分析ESCC患者预后因素,与肿瘤分化、T分期、N分期、临床分期、USP22及Ku80阳性表达水平显著相关(P=0.001,P=0.023,P=0.005,P=0.009,P0.001,P0.001)。COX多因素回归分析:肿瘤分化、USP22阳性表达和Ku80阳性表达为患者总生存期(OS)独立危险因素。ESCC 患者 1,3,5 年生存率为 88.75%,45.00%,20.65%;USP22 和 Ku80两者同时表达1,3,5年生存率为72.71%,18.22%,0;Ku80阳性组生存率低于阴性组(Log-rank χ2=21.50,P0.001);USP22阳性组生存率低于阴性组(Log-rank χ2=18.65,P0.001);高分化组生存率高于中分化组和低分化组(Log-rank χ2=14.94,P0.001)。实验结论:1.USP22和Ku80免疫阳性荧光反应均定位于细胞核,呈红色荧光,荧光overlap结果和Western blotting蛋白定量发现ECA109 Ku80过表达食管癌细胞株USP22蛋白表达高于食管癌ECA109细胞株中表达水平,USP22和Ku80蛋白表达水平显著相关。2.USP22和Ku80在人ESCC中高表达,且两者表达水平均与肿瘤组织分化和T分期相关,二者高表达呈现相关性,表达存在相互调控。3.肿瘤分化程度,USP22和Ku80的表达水平均为ESCC患者术总生存期独立危险因素,且两者表达具有显著相关性。4.USP22-Ku80表达模型有望成为ESCC诊断、预后的分子分型及新治疗靶点。创新性及意义:1.ESCC细胞中首次USP22-Ku80表达的基础研究,并发现其表达的相关性。2.ESCC患者检测USP22-Ku80分子表达模型有重要临床意义。
【图文】：

图１：邋Ａ：邋ＥＣＡ１０９细胞图（１０Ｘ１０）邋Ｂ：病毒转染的ＥＣＡ１０９邋Ｋｕ８０过表达细胞逡逑

食管鳞状细胞癌USP22和Ku80表达的基础研究及相关临床意义

图３：邋Ｋｕ８０与ＵＳＰ２２在ＥＣＡ１０９与ＥＣＡ１０９邋Ｋｕ８０过表达食管癌细胞中的表达分析逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.1

【参考文献】