MLL3突变AML家系的异常表观遗传学研究及大剂量DNR治疗AML的Cochrane系统评价

发布时间：2019-11-05 23:22

【摘要】：第一章MLL3突变AML家系的异常表观遗传学研究第一节MLL3突变AML家系的异常DNA甲基化研究背景和目的:众多研究表明异常的表观遗传学改变在肿瘤的发病中扮演重要角色。其中DNA甲基化是一种重要的表观遗传学改变,与多种肿瘤相关,包括急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)和结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)。在前期针对一个肿瘤家系的研究中,我们发现此家系的AML患者和CRC患者都存在MLL3基因(mixed lineage leukemia family gene 3,混合系白血病家族基因3 )突变。MLL3基因突变有可能导致DNA异常甲基化。本研究进一步对该肿瘤家系进行研究,探索DNA甲基化在该肿瘤家系发病中的作用。材料和方法:我们选择了一个中国人肿瘤家系,采集家系中2例AML患者和2例CRC患者的骨髓和外周血标本,以及该家系无MLL3基因突变的1例正常对照的外周血标本,检测全基因组的DNA甲基化水平,并探索了甲基化在疾病发生发展中的作用。全基因组DNA甲基化水平检测采用的是Illumina公司Infinium人类甲基化检测芯片(450K)。结果:研究结果发现4例MLL3基因突变的肿瘤患者的DNA甲基化状态与正常对照存在显著差异,且呈现普遍的高甲基化状态。此外,处于急性期的AML患者相比缓解期的AML患者,存在更多的高甲基化CpG岛。在4例肿瘤患者中存在59个相同的甲基化异常基因(高甲基化或者低甲基化)。全基因组DNA甲基化分析结果证实所有异常甲基化位点不仅存在于普遍认同的启动子区域,许多异常甲基化位点也存在于基因主体区域。结论:研究结果表明该家系中肿瘤的发生可能与异常DNA甲基化密切相关,DNA高甲基化可能在该组肿瘤发生发展中发挥了重要作用。第二节MLL3突变AML家系的H3K4me3异常机制研究背景和目的:研究表明异常的组蛋白表观遗传学改变在肿瘤的发病中扮演重要角色。其中H3K4me3 (histone3lysine4trimethylation,组蛋白3赖氨酸4三甲基化)是最常见的一种组蛋白修饰,多出现在活化基因的启动子区域,促进下游基因表达。H3K4(histone 3 lysine 4,组蛋白3赖氨酸4)异常甲基化与肿瘤的发生密切相关。前期在针对一个肿瘤家系的研究中,我们发现此家系的AML患者和CRC患者都存在MLL3基因突变。MLL3基因编码的蛋白作为甲基化转移酶,可以调控H3K4的甲基化。本研究通过探索MLL3基因突变家系中H3K4me3在基因组中的不同的结合位点,进一步明确该肿瘤家系发病的H3K4me3异常相关机制。材料和方法:选取了肿瘤家系中存在MLL3基因突变的3例肿瘤患者(1例AML患者,2例CRC患者)以及1例无MLL3基因突变的正常对照作为研究对象,采用Chip-chip的方法,通过研究与H3K4me3抗体发生免疫共沉淀的启动子区域,将捕获的启动子涉及的下游基因定位到KEGG (Kyoto Encyclopedia Of Genes And Genomes,京都基因和基因组百科全书)通路中。结果:研究结果发现H3K4me3结合的启动子的数目在MLL3基因突变的肿瘤组与正常对照之间没有显著差异,而在肿瘤患者中捕获了特殊的H3K4me3结合谱,涉及到的相关基因集中在与肿瘤发生密切相关的通路上。结论:研究结果表明肿瘤家系中的AML及CRC的发生可能与特殊的H3K4me3结合谱相关,进一步进行全基因组的H3K4me3结合位点测序可能有助于发现新的肿瘤标志物。第二章大剂量DNR治疗AML作用与安全性的Cochrane系统评价背景和目的:系统评价大剂量柔红霉素(high-dose of daunorubicin, HD-DNR)与传统低剂量柔红霉素(low-dose of daunorubicin,LD-DNR)或者去甲氧柔红霉素(idarubicin, IDA)相比,在急性髓系白血病诱导治疗的效用和安全性。材料和方法:计算机检索Pubmed,Embase, Cochrane library数据库以及相关专业网站和会议摘要,纳入符合标准的随机对照试验。对纳入研究进行偏倚风险评价,数据提取。使用Revman 5对各研究数据进行meta分析,无法合并的数据采用定性描述方法。主要结局指标是总体生存率(overall survival,OS ),无病生存率(disease-free survival,DFS ),无事件生存率(event-free survival,EFS);次要结局指标是完全缓解(complete remission,CR)率,早期死亡率,复发率,不良反应发生率。结果:共检索出1796篇文献,最终纳入6项研究,共计3824例急性髓系白血病患者。(1)HD与LD-DNR相比,CR(相对危险度(relative risk,RR=1.19,95%置信区间(confidence interval,CI) [1.12,1.18],p0.00001),OS(风险比(hazard ratio,HR) =0.88, 95%CI[0.79,0.99],p=0.002), EFS(HR=0.86, 95%CI[0.74,1.00], p=0.008),差异均有统计学意义。对于DFS,复发率,诱导其死亡率和不良反应,两者之间尚没有足够证据说明其差异有统计学意义。(2) HD-DNR与IDA相比,各项结局指标均没有足够证据说明其差异有统计学意义。结论:(1)与LD-DNR相比,HD-DNR可以提高完全缓解率,总体生存率以及无事件发生率,在不良反应方面没有统计学显著的差异。(2) HD-DNR与IDA在效用和安全性上尚没有足够的证据表明两组存在差异。
【图文】：

家系图,家系图,肺癌,研究对象

１．２．１材料逡逑１．２．１．１研究对象逡逑该家系成员均为中国汉族人，图１为家系图。逡逑ｉｉ－１邋＾邋ｉｉＴ￣逦ｉｉ＾邋ｎ－４＾逦￣逡逑口正常男性逦0正常女性逦１－２．？肺癌逡逑ＩＩ－

测序,全基因组,甲基化,实验流程

１．２．２．４全基因组ＤＮＡ甲基化测序实验逡逑采用Ｉｌｌｕｍｉｎａ公司（Ｓａｎ邋Ｄｉｅｇｏ，邋ＣＡ，邋ＵＳＡ）的Ｉｎｆｍｉｕｍ人类甲基化检测芯片（４５０Ｋ）逡逑进行测序。逡逑（１）测序实验流程图如下：逡逑
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71;R735.34

【参考文献】