【摘要】：目的:建立肝癌对索拉非尼(Sorafenib)耐药细胞株Bel-7402/Sora并初步探讨青蒿琥酯(ART)逆转其耐药性的作用及其相关机制。方法:1.通过MTT法测定Sorafenib对肝癌细胞Bel-7402生长抑制的影响,计算其半抑制浓度(IC50)。通过大剂量冲击联合持续低剂量浓度递增的方法建立肝癌细胞Bel-7402耐药株Bel-7402/Sora。显微镜下观察肝癌细胞及耐药株形态差异。MTT法测定肝癌耐药细胞株IC50及其耐药倍数。Western-blot法检测两种细胞在给予不同浓度Sorafenib及蛋白GRP78和Beclin1的表达差异。2.采用MTT法观察不同浓度ART对肝癌耐药细胞株与亲本细胞株的抑制作用,并计算出ART的无细胞毒性浓度。通过不同浓度的Sorafenib联合无毒性浓度ART前后对肝癌耐药细胞株增殖的影响,计算其逆转倍数及相对逆转效率。Western-blot法检测在给予不同浓度Sorafenib联合无细胞毒性浓度ART前后蛋白GRP78和Beclin1的表达差异。结果:1.光镜下见Bel-7402细胞和Bel-7402/Sora细胞贴壁生长,单层上皮样分散排列。Bel-7402细胞形态规则,大小均衡,胞质内无空泡样物质,边界整齐且呈梭形生长。Bel-7402/Sora细胞形态不规则,大小不一,胞质内可见大量空泡样物质及颗粒,边界不齐,聚集生长,生长速度较正常细胞缓慢。2.Sorafenib 对于 Bel-7402/Sora 细胞的 24h IC50=37.7μmol/L,48h IC50=8.133μmol/L。综合24h与48h耐药及亲本细胞IC50值变化,因细胞性状等因素影响导致48h组无明显意义,故本实验选取24h组为标准实验组。Bel-7402/Sora相对于Bel-7402对Sora的耐药指数为2.42。Bel-7402/Sora细胞中GRP78和Beclin1表达均上升。3.无细胞毒性青蒿琥酯联合索拉非尼对肝癌耐药细胞Bel-7402/Sora的24h IC50=11.93μmol/L。经计算ART联合索拉非尼作用于Bel-7402/Sora细胞的逆转指数为3.16,相对逆转效率为116%。青蒿琥酯联合索拉非尼用于耐药细胞Bel-7402/Sora中时GRP78和Beclin1表达均明显降低。结论:1.建立肝癌对索拉非尼耐药细胞株Bel-7402/Sora,证明GRP78和Beclin1参与了细胞耐药性的形成。2.ART可通过降低蛋白GRP78和Beclin1的表达来逆转索拉非尼作用于肝癌细胞产生的耐药。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7
【参考文献】
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