E盒结合锌指蛋白2对非小细胞肺癌预后的意义及其介导的多药耐药机制

发布时间：2019-11-23 16:18

【摘要】：目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对非小细胞肺癌(NSCLC)预后的意义及介导的多药耐药机制。方法选取72例NSCLC患者癌组织及癌旁组织,免疫组织化学染色检测组织ZEB2的表达,分析ZEB2表达与NSCLC患者临床资料及生存预后的关系。按照转染类型将细胞分为3组:ZEB2-si RNA组、ZEB2-NC组和空白对照组(Mock)。采用小干扰RNA(si RNA)技术降低A549细胞ZEB2表达,分别采用不同浓度顺铂、紫杉醇处理A549细胞,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Western blot检测细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)表达。结果 ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率为77.8%(56/72),癌旁组织阳性表达率为23.6%(17/72),ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率高于癌旁组织(P0.01)。肿瘤直径≥5 cm组ZEB2阳性表达率高于肿瘤直径5 cm组,Ⅲ、Ⅳ期组ZEB2阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ组,淋巴结转移组ZEB2阳性表达率高于无淋巴结转移组,中低分化组ZEB2阳性表达率高于高分化组,各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。ZEB2阳性组总生存率和无病生存期低于阴性组(P0.05)。Mock组、ZEB2-NC组和ZEB2-si RNA组细胞存活率均随化疗药物浓度增加而降低,其中ZEB2-si RNA组细胞存活率低于ZEB2-NC组(P=0.000)。经Cisplatin、Paclitaxel处理后,与Mock组、ZEB2-NC组比较,ZEB2-si RNA组细胞凋亡率增加,G_0/G_1期所占百分率降低,S期所占百分率升高,组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。ZEB2-si RNA组P-gp、LRP蛋白表达水平低于Mock组和ZEB2-NC组(P=0.000),ZEB2-NC、Mock组P-gp、LRP蛋白表达比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 NSCLC组织ZEB2表达上调,抑制ZEB2可以降低耐药蛋白P-gp、LRP表达,并逆转肺癌的多药耐药特性。
【图文】：

癌组织,蛋白

中国现代医学杂志第27卷附表ZEB2表达与NSCLC临床资料的关系临床资料例数ZEB2χ2值P值阳性阴性性别男3928111.7620.184女33285肿瘤直径<5cm4127147.8340.004≥5cm31292年龄<60岁312560.2590.611≥60岁413110病理分型腺癌332490.8990.343鳞癌39327TNM分期Ⅰ、Ⅱ30171313.2610.000Ⅲ、Ⅳ42393淋巴结转移是2817117.7180.005否44395分化程度高分化1688中分化3226610.0450.010低分化24222图1ZEB2蛋白在癌组织和癌旁组织中的表达（×200）癌旁组织癌组织别加入P-gp、LRP抗体，4℃孵育24h。再滴加二抗37℃孵育2h。PBS冲洗3次，按照ECL化学发光显影试剂盒显影，以β-actin作为内参照，分析目的条带相对表达量。1.4统计学方法数据分析采用SPSS19.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示。先进行正态性分布和方差齐性检验。对符合正态性分布的计量资料，多组间比较用单因素方差分析（one-wayANOVA）。方差齐时多组间比较用Bonferroni法，，方差不齐时用Welch近似F检验。计数资料比较用配对设计的四格表χ2检验。生存分析用Kaplan-Meier法，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1ZEB2蛋白在癌组织和癌旁组织中的表达ZEB2阳性主要表达于细胞质，以出现黄色或棕黄色颗粒沉淀为阳性细胞（见图1）。ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率为77.8%（56/72），癌旁组织阳性表达率为23.6%（17/72），ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率高于癌旁组织，两组间比较差异有统计学意义（χ2=42.258，P=0.000）。2.2ZEB2表达与NSCLC患者临床资料及预后的关系ZEB2表达与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关，肿瘤直径≥5cm组ZEB2表达阳性率高于肿瘤直径<5cm组?

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