miR-200a对肺癌A549细胞增殖、迁移及凋亡的影响

发布时间：2019-11-23 15:32

【摘要】：目的探讨miR-200a在肺癌细胞中的表达及其对A549细胞增殖、迁移及凋亡等生物学功能的影响。方法采用RTPCR检测肺癌细胞株A549、H23、H460和永生化人支气管上皮细胞株16HBE的表达水平。采用脂质体转染法将miR-200a mimics和阴性对照序列(miR-negtive control,miR-NC)分别转染A549细胞,运用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用生物信息学方法预测miR-200a的靶基因。结果 miR-200a在肺癌细胞株A549、H23和H460相对表达水平均低于16HBE组,差异有统计学意义(P0.05)。miR-200a mimics和miR-NC组分别转染A549细胞,CCK-8实验显示miR-200a mimics组在第4、5天时的OD值明显低于miRNC组,差异有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验显示miR-200a mimics组细胞克隆形成率为(33.13±0.74)%,明显少于miR-NC组(45.57±1.27)%,差异有统计学意义(P0.05)。Transwell实验显示,miR-200a mimics穿膜细胞数为(71.60±17.90)个,少于miR-NC组[(140.20±17.88)个],差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测显示,miR-200a mimics凋亡率为(17.80±1.90)%,明显高于miR-NC组[(11.33±1.96)%],差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学方法预测Tiam1等可能是miR-200a的靶基因。结论 miR-200a能够抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移并促进其凋亡,为肺癌的治疗提供潜在靶点。miR-200a可能通过靶基因Tiam1发挥其对肿瘤的调控作用。
【图文】：

测miＲ-200a潜在靶基因应用miＲWalk综合数据库(http://www．umm．uni-heidelberg．de/apps/zmf/mirwalk/)进行预测，并取其中Targetscan、miＲanda、ＲNAhybrid、miＲWalk和Microt4共5种工具计算基因交集。2结果2．1miＲ-200a在肺癌细胞株和正常支气管上皮细胞株中的表达ＲT-PCＲ检测肺癌细胞株及永生化人支气管上皮细胞株16HBE中miＲ-200a的表达，结果发现miＲ-200a在3种肺癌细胞株中的表达均明显低于16HBE(P均＜0.05)。其中以A549细胞中miＲ-200a的表达水平最低，因此选取A549细胞株作为进一步分析对象(图1)。图1miＲ-200a在不同细胞株中的相对表达水平2．2miＲ-200a对A549细胞增殖的影响以吸光度为纵坐标、时间点为横坐标，绘制细胞生长曲线。肉眼观察并记录克隆斑数目，计算克隆形成率，克隆形成率=(克隆形成数/接种细胞数)×100%。CCK-8法检测A549细胞转染miＲ-200amimics、miＲ-NC后1～5天的OD值，并绘制生长曲线。结果显示:与miＲ-NC组细胞相比，转染miＲ-200amimics细胞的OD值在4、5天时均降低(图2)，差异具有统计学意义(P均＜0.05)。平板克隆形成实验显示miＲ-200amimics转染组细胞克隆形成率为临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2017Sep;33(9)·993·

(33.13±0.74)%，，明显少于miＲ-NC组［(45.57±1.27)%］，差异具有统计学意义(P＜0.05，图3)。图2转染miＲ-200amimics后A549细胞生长曲线图3平板克隆形成实验结果A．miＲ-NC组;B．miＲ-200amimics组;C．克隆形成率2．3miＲ-200amimics对A549细胞迁移能力的影响Transwell细胞体外迁移能力检测结果显示，转染miＲ-200amimics穿膜细胞数为(71.60±17.90)个/孔，少于miＲ-NC组［(140.20±17.88)个/孔］，差异有统计学意义(P＜0.05，图4)。2．4miＲ-200amimics对A549细胞凋亡率的影响流式细胞术检测转染48h后两组细胞的凋亡率，结果显示，miＲ-200amimics和miＲ-NC组的细胞凋亡率分别为(17.80±1.90)%和(11.33±1.96)%，miＲ-200amimics组的细胞凋亡率明显高于miＲ-NC组，差异有统计学意义(P＜0.05，图5)。图4Transwell迁移实验结果图5流式细胞术检测检测细胞凋亡结果A．miＲ-NC组;B．miＲ-200amimics组;C．细胞凋亡率2．5miＲ-200a靶基因的预测利用miＲWalk综合数据库，并取其中Targetscan、miＲanda、ＲNAhy-brid、miＲWalk和Microt4共5种数据库的计算结果取其交集，所得部分靶基因详见表1。选择其中1个潜在靶基因Tiam1利用TargetScan、DIANA-microT表1利用miＲWalk预测所得miＲ-200a的部分靶基因GeneIDGenesymbolGeneIDGenesymbol4884NPTX155356SLC22A157074TIAM1135295SＲSF1251762ＲAB8B2334AFF291445ＲNF1857803PTP4A1688KLF523211ZC3H46782HSPA1379699ZYG11B60468BACH283989FAM172A541565C8orf586401SELE5594MAPK157464STＲIP210513APPBP2200081TXLNA·994·临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2017Sep;33(9)

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