肝癌患者血清结合珠蛋白特征性聚糖谱图构建及其潜在临床应用

发布时间：2019-11-22 20:13

【摘要】：蛋白质糖基化是一种常见的翻译后修饰,其与肿瘤的发生发展息息相关,涉及肿瘤细胞信号转导、细胞解离与侵袭、细胞与基质间相互作用、血管生成、免疫调节、肿瘤生长与转移等过程。糖蛋白与疾病的关系,尤其与癌症相关的研究已取得进展。结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)是一种酸性糖蛋白,主要由肝脏合成和降解,已发现在癌症发生发展过程中其聚糖结构发生变化。本研究运用亲和层析原理纯化血清Hp,通过抗体辅助的凝集素芯片及凝集素印迹,比较分析正常和肝癌血清中糖蛋白Hp的凝集素亲和谱,解析肝癌血清Hp特征性聚糖结构;建立基于凝集素偶联磁珠的快速检测方法,评估差异性Hp聚糖作为糖生物标志物及其在肝癌诊断中的潜在应用价值。第一部分肝癌患者血清Hp特征性聚糖谱图构建及验证本部分应用抗体辅助的凝集素芯片技术比较研究了肝癌患者和正常受试者血清中Hp凝集素亲和谱,同时采用凝集素印迹的方法验证,获得肝癌血清Hp的特征性糖谱。结果表明,肝癌患者血清Hp对凝集素LCA、UEA I、AAL、SNA-I、Con A、CALSEPA、RCA I、PHA-L和Jacalin的亲和作用增强,而对凝集素LEL和PHA-E亲和作用减弱。通过凝集素亲和谱的聚糖结构推断,提示肝癌患者血清糖蛋白Hp末端和核心岩藻糖、α2,6-唾液酸、高甘露糖、α-甘露糖、β1,4-半乳糖、β1,6分支糖链结构、T/Tn抗原和唾液酸化T抗原增加;而N-乙酰葡萄糖胺β1,4分支和平分型结构减少。选取PHA-E、AAL、LCA、SNA-I、Jacalin和PHA-L进行凝集素印迹验证,结果与抗体辅助凝集素芯片结果一致,提示Hp异常的糖基化修饰与肝癌的发生发展密切相关。第二部分基于凝集素磁珠的快速ELISA检测系统建立及血清Fuc-Hp临床应用评估肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种常见恶性肿瘤,占肝癌总发病率的80%以上。肝脏病变,尤其是肝癌的发生发展伴随着糖基化异常改变。前期研究发现,Hp的岩藻糖基化聚糖(Fuc-Hp)含量在肝癌患者血清中显著升高。本研究通过建立高通量高灵敏度的靶蛋白糖基化定量分析方法,旨在研究岩藻糖基化Hp对原发性肝癌的临床诊断价值。本研究通过对两种传统凝集素酶联免疫吸附试验(Lectin ELISA)进行比较,在优势方法—反相凝集素ELISA的基础上联合磁珠,建立了基于凝集素磁珠的快速ELISA检测方法。同时检测260例正常和肝癌患者血清中Fuc-Hp含量和Hp蛋白水平,建立Fuc-Hp指数(Fuc-Hp/Hp=Fuc-Hp含量/Hp蛋白水平;ELISA Index=Fuc-Hp光密度值/Hp蛋白光密度值)用于反映单位Hp的岩藻糖基化程度。结果显示,血清Fuc-Hp含量、Fuc-Hp/Hp与ELISA Index:(1)在肝癌组和AFP阴性肝癌组比正常组均显著增高;(2)与AFP联合检测诊断肝癌,灵敏度、特异性以及准确性均大幅度提高。本部分研究表明,Fuc-Hp及其指数对肝癌,尤其是AFP阴性肝癌有良好的预测和诊断效能;Fuc-Hp指数与AFP联合检测可提高肝癌预测和诊断效率。结论1.运用抗体辅助的凝集素芯片与凝集素印迹技术,筛选出9种亲和信号强度增强和2种亲和信号强度减弱的凝集素,通过聚糖结构分析,构建肝癌特征性血清Hp聚糖谱图。2.建立了基于凝集素磁珠的快速ELISA检测方法,并用于分析血清Hp岩藻糖基化改变,初步获得了AFP阴性和AFP阳性肝癌通用的候选生物标记物。3.Fuc-Hp在肝癌患者血清中显著升高,证明其作为聚糖标志物诊断肝癌的潜在应用价值。Fuc-Hp/Hp或ELISA Index与AFP联合诊断可提高肝癌预测和诊断能力。创新性1.肝癌患者血清中Hp的特征性聚糖结构,可作为潜在聚糖分子标志物,为肝癌早诊早治提供新的诊断指标和治疗靶点。2.基于凝集素以及凝集素偶联磁珠的Hp异质体检测系统的建立,为靶蛋白糖基化定量分析提供了新方法和新思路。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【相似文献】