共轭亚油酸异构体及异油酸对人乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用及机理研究

发布时间：2020-01-24 08:56

【摘要】：共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一种功能性油脂,是食物中的天然成分,对人体无毒副作用,主要存在于牛、羊等瘤胃动物的乳脂及肉制品中。近年来大量动物试验表明CLA具有抗癌、抗动脉粥样硬化、降低脂肪沉积等重要生理功能。异油酸(Vaccenic acid,VA,t11-C18:1)是一种天然反式脂肪酸,目前关于反式脂肪酸与癌症的关系还尚不明确,需进一步深入研究。本文应用人乳腺癌MCF-7细胞为体外模型,用MTT法、荧光染色及流式细胞术比较了3种CLA异构体(c9,t11-CLA,t10,c12-CLA,t9,t11-CLA)及2种反式脂肪酸(反油酸、异油酸)对乳腺癌细胞MCF-7细胞生长、凋亡及细胞周期的影响,以筛选出更有效抗癌的CLA异构体,并探讨反油酸、异油酸对MCF-7细胞的影响。另外,运用RT-PCR和Western-blot方法研究3种CLA单体激活PPARγ的能力和PPARγ调控凋亡相关基因和蛋白表达之间的相互关系,从基因和蛋白水平阐明CLA单体及异油酸诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的可能机制,为尽早将这一天然产物应用于乳腺癌的防治提供实验依据。实验结果如下:3种CLA异构体及反式脂肪酸VA作用MCF-7细胞48 h后,均可抑制MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡,且抑制作用呈剂量依赖性,但CLA的抑制作用显著强于VA。在浓度≤50μmol/L时,t10,c12-CLA的抑制作用强于c9,t11-CLA,而≥100μmol/L时,c9,t11-CLA的抑制作用强于t10,c12-CLA。t9,t11-CLA单体在浓度为50μmol/L时对MCF-7细胞的增殖抑制率就达到了34.01%,它在抑制MCF-7细胞增殖、促进细胞凋亡方面是最有效的CLA单体。EA作用MCF-7细胞48 h后,则表现出在一定剂量范围内促进MCF-7细胞增殖。与对照组相比,各CLA单体及VA组随着作用浓度的增加,MCF-7细胞G0/G1期缩短,S期延长,显然,CLA及VA可将细胞阻滞在S期,阻滞了DNA合成,不能继续完成下面的细胞周期活动,从而抑制细胞增殖。由此可以推测CLA及VA可能通过影响细胞周期进程从而抑制细胞分裂增殖并诱导凋亡。不同CLA异构体能促进MCF-7细胞中PPARγ基因及其蛋白的表达,而且PPARγ的变化与促凋亡基因bcl-xS的变化趋势相一致。反式脂肪酸VA也能促进促凋亡基因bcl-xS mRNA及蛋白Bax的表达。100μmol/L c9,t11-CLA,50μmol/L t10,c12-CLA,50和100μmol/L t9,t11-CLA组的抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白Bcl-2表达均下降,其中t9,t11-CLA组,抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白表达水平明显降低。从bcl-xS与bcl-xL mRNA及其蛋白Bax与Bcl-2的表达比例可知,VA和c9,t11-CLA在100μmol/L时表达最高,而t10,c12-CLA和t9,t11-CLA则在50μmol/L时表达最高。结果表明VA和3种CLA异构体均能引起凋亡相关基因bcl-xS与bcl-xL及其蛋白Bax与Bcl-2的表达变化,只是表现出的最佳浓度不同。CLA单体通过促进PPARγ的表达进而调控相关凋亡基因及其蛋白的表达,从而诱导细胞凋亡。
【图文】：

t11-CLA，t10,c12-CLA，t9,t11-CLA 的化学结构Fig.1.1 The chemical constitution of c9,t11-CLA，t10,c12-CLA，t9,t11-CLALA 的生理功能年来研究发现，CLA 具有抗癌、抗动脉粥样硬化、抗氧化、减肥、促进生长、降低脂肪沉积、提高骨质密度以及调节免疫等重要的生且 CLA 对许多癌细胞的生长具有较强的抑制和促凋亡作用[32-34]。抗癌作用几年来，国内外大量试验表明：CLA 的抑癌作用和亚油酸具有明显LA 可拮抗多种致癌物质从而抑制肿瘤发生。动物试验表明，一定浓结肠癌、胸腺癌和人类恶性黑素瘤细胞有抑制或杀死作用，，而且 CL某些细胞色素的活性，以及抑制癌细胞中核酸和蛋白质的合成[35]。0,c12-CLA 和 c9,t11-CLA 这 2 种异构体可直接抑制 MCF-7 细胞系中

图 1.2 异油酸的空间结构Fig.1.2 The space constitution of Vaccenic acid与肿瘤明，过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome prolepters，PPARγ）通过内源性和外源性两种途径导致肿瘤中，PPAR 可激活位于肿瘤细胞表面的死亡抗体，从PPAR 的结构及功能差异，可分为 3 种不同亚型：PPA其中 PPARγ位于机体众多信号传导的交叉部位，具有多机体对胰岛素的敏感性、促进脂肪生成和脂肪细胞分制炎症因子生成和炎症形成、保护心血管、影响肿瘤最为密切。配体激活 PPARγ后，不但可以抑制部分肿细胞发生凋亡，因此成为肿瘤治疗的新靶点[62]。它通视黄酸 X 受体（Retinoic X receptor，RXR）形成异二
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 李菁华;;个性化护理对晚期乳腺癌新辅助化疗患者负性情绪和免疫功能的影响[J];安徽医药;2015年06期

2 黄桂东;毛健;;t9,t11-CLA对血管内皮细胞的保护作用及其相关机制[J];食品研究与开发;2014年24期

3 齐仁立;黄金秀;宋凡;陈英;黄萍;;共轭亚油酸诱导多种细胞凋亡[J];生物技术通报;2014年01期

4 赵瑞杰;李引乾;王会;王广彬;娜日苏;金大鹏;关伟军;马月辉;;Caspase家族与细胞凋亡的关系[J];中国畜牧杂志;2010年17期

5 刘佩;沈生荣;阮晖;何国庆;;共轭亚油酸的生理学功能及健康意义[J];中国粮油学报;2009年06期

6 袁贤琳;陈青;杨湘玲;钟翎;;共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制的研究[J];肿瘤;2009年06期

7 刘兴会;杨天和;;反式脂肪酸与心血管疾病的研究进展[J];临床心血管病杂志;2008年07期

8 董贵成;曹丽霞;那日苏;照日格图;李少英;博·格日勒图;;共轭亚油酸对癌的抗性及机制探索[J];食品科学;2008年04期

9 王丽芳;卢德勋;马燕芬;;共轭亚油酸的来源及其生物学作用[J];乳业科学与技术;2008年02期

10 冯有胜;;共轭亚油酸的生理功能[J];重庆工商大学学报(自然科学版);2007年04期

相关博士学位论文 前1条

1 邱斌;反式脂肪酸诱导内皮细胞损伤和凋亡作用机制的研究[D];南昌大学;2011年

相关硕士学位论文 前1条

1 于芳;共轭亚油酸对乳腺癌细胞系SKBr3生长的作用及机理研究[D];第四军医大学;2004年

本文编号：2572613