白细胞介素17A对人肝癌细胞系干性的影响研究

发布时间：2020-02-03 14:04

【摘要】：目的:探讨白细胞介素17A(Interleukin-17A,IL-17A)对人肝癌细胞系Hep3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L干性的影响,以期进一步研究IL-17A与肝癌发展之间的关系。方法:经ELISA检测人肝癌细胞系Hep3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L是否能分泌IL-17A,进一步通过体外3D成球实验研究IL-17A对Hep 3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L肝癌细胞系成球能力的影响;采用实时无标记动态细胞分析技术(Real Time Cellular Analysis,RTCA)检测IL-17A对成球能力增强的肝癌细胞增殖及迁移的影响;采用SYBRGreen实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-timePCR,qRT-PCR)检测加入IL-17A后成球能力增强的肝癌细胞中IL-17RA以及IL-17RC的mRNA的表达情况;运用流式细胞技术检测分析加入IL-17A后成球能力增强的肝癌细胞上干性相关表面分子标志物CD133、CD44及EpCAM的表达,同时,通过qRT-PCR检测干性相关基因5OX2,NANOG,OCT4及BMI1的mRNA的表达情况;通过蛋白印迹法(Western blot)检测上皮-间质转换(Epithelial to mesenchymal transition,EMT)相关蛋白 E-钙粘蛋白(E-cadherin),N-钙粘蛋白(N-cadherin),波形蛋白(vimentin)的表达。结果:人肝癌细胞系Hep3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L自身均不能分泌IL-17A,所以可在培养上述细胞时加入IL-17A做进一步研究。研究发现,在存在50ng/ml IL-17A及接种细胞数均为500个的条件下,Hep 3B细胞的成球数目显著增加[由(113.0±10.3)个增加至(180.0±7.2)个,t=5.533,P0.001],而 HepG2(t=0.317,P=0.760),MHCC97H(t=1.087,P=0.325)及 MHCC97L(t=0.279,P=0.785)的成球数目无明显变化。同时,IL-17A促进了 Hep3B细胞的增殖和迁移。对Hep3B的进一步分析发现,加入50ng/ml IL17A后,IL-17A的应答受体IL-17RA及IL-17RC的mRNA的表达水平随着作用时间的增加而升高;干性相关基因SOX2(t=4.749,P=0.042),NANOG(t=19.600,P=0.003),OCT4(t=37.310,P0.001),BMI(t=16.810,P=0.004)表达显著上调;通过qRT-PCR检测mRNA水平及Western blot检测蛋白表达情况时发现,随着IL-17A作用时间的增加,EMT相关上皮源性标志物E-Cadherin的mRNA表达水平先降低后升高,蛋白表达无明显变化;间质细胞标志物N-Cadherin的mRNA及蛋白在50ng/ml IL-17A作用48小时后表达增加,vimentin的mRNA表达水平先升高后降低,蛋白不表达。结论:IL-17A在一定程度上增强了 Hep 3B肝癌细胞的干性。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

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