CathepsinZ和CD97对胃癌细胞株生物学特性的影响及分子机制和临床研究

发布时间：2020-02-25 23:41

【摘要】：目的：本研究希望通过对CD97和CathepsinZ (CTSZ)对胃癌细胞株生物学特性的影响及分子机制研究,探索CD97和CTSZ在胃癌细胞侵袭力改变中的作用及作用机制。同时通过研究胃癌患者胃癌组织中CTSZ的表达及临床意义,探讨其在胃癌发生、发展过程中的作用,并进一步了解其在临床方面的价值,为胃癌的早期诊断和免疫治疗提供理论基础。方法：本实验首先通过PCR及western blot对不同胃癌细胞株的CTSZ基因水平及总蛋白进行检测,随后分别以pcDNA3.1及pGCsilencer质粒作为载体,重组构建CTSZ过表达质粒及siRNA CTSZ干扰质粒。通过转染胃癌细胞得到CTSZ过表达克隆和CTSZ RNAi克隆,并通过共聚焦显微镜、流式细胞术、invasion assay、刮痕试验等观察其对胃癌细胞生物学行为造成的影响。此外,进一步研究可能的细胞骨架信号通路,探讨CTSZ和CD97影响胃癌细胞侵袭性的作用机制。应用免疫组化对胃癌患者的正常组织、癌旁组织、癌组织进行染色,检测CTSZ表达水平。同时观察胃癌组织CTSZ表达水平在胃癌TNM不同分期时的差异。结果：①不同胃癌细胞株的CTSZ基因与总蛋白表达水平不同；②CTSZ与胃癌细胞中溶酶体的分布区域相同；③与未转染组相比,过表达质粒pcDNA3.1-CTSZ转染胃癌细胞后,细胞骨架呈现向四周发散状改变,细胞周期缩短,侵袭性和迁徙能力上升。干扰克隆pGCsilencer-CTSZ转染胃癌细胞后,迁徒相关蛋白及周期相关蛋白表达水平下降,侵袭性和迁徙能力下降；④转录因子筛查中发现与未转染组相比,转录因子SP1在pcDNA3.1-CD97过表达组增高,在pcDNA3.1-CD97+JNK信号通路抑制剂SP600125组表达下降；⑤免疫共沉淀(chips)检测发现SP1转录因子作用于CTSZ转录起始点上游1000bp,和双荧光素酶报告基因检测到的CD97同样作用于CTSZ转录起始点上游1000bp的结果一致;，

本文编号：2582858