环氧木香内酯抑制肾癌细胞中COX-2表达机制的研究

发布时间：2020-03-26 10:26

【摘要】：恶性肾肿瘤约占所有肿瘤的2%,每年全世界诊断的新发病例超过273,000例,其中肾细胞癌占所有病例的85%以上。肾细胞癌也是最致命的常见泌尿系肿瘤。尽管肾细胞癌的治疗近年来有很大的改善,但25-30%的患者有转移。转移性肾细胞癌患者预后不佳,中位生存期少于一年。手术切除是局部肾细胞癌的治疗标准,但约30-40%的患者可能在初始根治性手术后出现疾病进展或复发。传统化疗和放射治疗对肾细胞癌的疗效都不理想。所以,迫切需要我们寻找新的治疗策略和更有效的药物治疗肾细胞癌,以达到延长患者的生存时间和提高患者的活质量的目的。银胶菊内酯是最初从小白菊中分离出来的主要倍半萜内酯。银胶菊内酯由于其抗炎活性,在世界各地作为药物使用已经有很长远的历史了。银胶菊内酯常常用于预防偏头痛和治疗类风湿性关节炎。有很多文献证明表明,银胶菊内酯是一种有效的抑制NF-κB活化的抑制因子,可抑制体内外模型中促炎细胞因子的表达。有研究报道,银胶菊内酯通过抑制NF-κB通路活性治疗肾细胞癌。在关于抑制NF-κB的研究中,银胶菊内酯的化合物及其衍生物是一种在治疗各种炎性相关疾病中很有潜力的药物。最近还有报道说,银胶菊内酯可以抑制细胞增殖和凋亡,增强抗癌药物在体外癌细胞中的作用,包括非小细胞肺癌,宫颈癌,结肠癌,急性骨髓性白血病或胰腺癌。由于银胶菊内酯在酸性和碱性条件下都很不稳定,导致银胶菊内酯结构相关的化合物环氧木香内酯的发展。然而,作为生物活性分子,环氧木香内酯的抗癌机制尚未得到阐明。NF-κB是已知通过其下游靶基因调节广泛生物学作用(包括增殖,转移和凋亡)的重要转录因子家族。越来越多的证据表明NF-κB信号通路在癌症发生中起重要作用。肿瘤主要通过内部或外部因素的建立以提高NF-κB的活性。NF-κB已经在许多恶性肿瘤和肾透明细胞癌中发现。此外,研究表明抑制NF-κB活化可能是肾细胞癌治疗的靶点。炎性抗肿瘤反应在抑制人类恶性肿瘤的肿瘤生长中起重要作用。在花生四烯酸合成前列腺素的过程中,COX-2作为限速酶,并且NF-κB可以调节COX-2的表达。COX-2在肿瘤进展过程中、肿瘤细胞凋亡过程中、肿瘤血管生成和转移过程中,以及致癌物质的形成过程中起重要作用。COX-2通常在各种人类癌症(包括肾细胞癌)中不受调节。多种实验证实,选择性COX-2抑制剂能有效预防炎症,抑制肿瘤细胞的增殖以及肿瘤中血管的生成,并引起人类癌细胞发生凋亡。COX-2可能是化疗方案中肾细胞癌特异性细胞毒性的有用靶标。在本研究中,我们研究了环氧木香内酯抑制COX-2的机制,并揭示了环氧木香内酯可以靶向IKKβ从而抑制NF-κB信号通路,并进一步下调COX-2表达。因此,结果表明,环氧木香内酯通过靶向IKKβ以抑制COX-2表达,这意味着其可能潜在地成为有效治疗肾细胞癌的方式。实验目的:银胶菊内酯是最初从小白菊中分离出来的主要倍半萜内酯,是NF-κB通路活化的有效抑制剂。作为银胶菊内酯的结构相关化合物的环氧木香内酯在酸性和碱性条件下更稳定。然而,作为生物活性分子,环氧木香内酯的详细抗癌机制尚未得到阐明。实验方法:通过环氧木香内酯作用人肾细胞癌后,测定研究其迁移,集落形成和凋亡等生物学功能。然后通过电泳迁移率变动分析(EMSA),双荧光素酶报告基因检测和共焦显微镜免疫荧光分析NF-κB通路活性和NF-κB p50/p65核定位。最后通过蛋白质印迹检测相关蛋白质的表达水平。实验结果:环氧木香内酯通过抑制NF-κB DNA结合活性强烈抑制COX-2的表达。此外,环氧木香内酯通过激活细胞色素C/Caspase信号通路诱导凋亡。同时,环氧木香内酯通过抑制EMT和MMPs的合成来抑制癌细胞的侵袭和转移,并增加了TIMP-2的表达。实验结论:环氧木香内酯通过靶向IKKβ以抑制COX-2表达,这意味着其可能潜在地成为有效治疗肾细胞癌的方式。
【图文】：

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大连医科大学硕士学位论文氧木香内酯抑制肾细胞癌增殖并改变细胞形态为了确定环氧木香内酯在人类肾细胞癌中的作用与功能，我们通过 CCK检测了环氧木香内酯对几种人类肾细胞癌细胞系的细胞增殖和细胞形如图 1 所示，与对照组相比，环氧木香内酯（作用 24h）显著降低了与细胞之间的接触，并且丝状伪足的形成明显减少。（三）结果

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我们接下来评估了环氧木香内酯处理后对786-0和Caki 1细胞的细胞周期的响。如图 4A，4B 所示，环氧木香内酯处理 24h 后，，引起 786-0 和 Caki 1 细胞期细胞周期阻滞。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.11

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