吉西他滨诱导胰腺癌星状细胞高分泌CXCL14进而促进胰腺癌细胞侵袭转移的机制研究

发布时间：2020-03-27 07:32

【摘要】：目的通过实验研究化疗药物吉西他滨(GEM)处理胰腺癌星状细胞(CaPSC)后上清液中趋化因子CXCL14的表达变化情况,以及高表达CXCL14的CaPSC上清液对胰腺癌细胞增殖、侵袭及转移的影响及其相关机制的研究。方法组织块提取法从新鲜的胰腺癌组织中提取CaPSC;ELISA法检测吉西他滨处理后的CaPSC上清液中CXCL14的表达变化情况;构建CXCL14过表达质粒及干扰质粒,慢病毒包装质粒后感染CaPSC,构建稳转细胞系CaPSC-CXCL14及CaPSC-shCXCL14;采用CCK-8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测并分析CaPSC-CXCL14细胞上清液对胰腺癌细胞系Panc-1及BXPC-3增殖、侵袭及转移能力的影响;通过real-time PCR、Western blot分别检测高表达CXCL14的CaPSC细胞上清液处理Panc-1及BXPC-3后细胞中β-catenin及EMT相关m RNA及蛋白质的表达变化情况。结果 ELISA结果显示GEM处理CaPSC后,细胞上清中CXCL14的表达明显增加;慢病毒包装质粒转染技术成功构建CXCL14过表达细胞株CaPSC-CXCL14及下调表达细胞株CaPSC-shCXCL14;CCK-8检测结果显示:CaPSC-CXCL14上清液处理Panc-1及BXPC-3细胞后第1、2、3天细胞增殖速率与CaPSC上清液处理组比较均无明显改变(P0.05;P0.05,P0.05),差异无统计学意义;划痕实验结果显示:划痕后24h、48h,CaPSC-CXCL14上清液处理胰腺癌细胞组细胞相对迁移距离均高于CaPSC上清液处理组,Panc-1(P0.05;P0.01)、BXPC-3(P0.05;P0.05),差异有统计学意义,而且该效应被XAV-939显著抑制;Transwell侵袭实验结果表明:细胞接种24h、48h后,CaPSC-CXCL14上清液处理胰腺癌细胞组的侵袭细胞数量多于DMEM、CaPSC及CaPSC-shCXCL14上清液处理组,Panc-1(P0.01、P0.01、P0.01),BXPC-3(P0.01、P0.05、P0.05),差异有统计学意义,该效应同样被XAV-939显著抑制;Western blot、real-time PCR结果显示:CaPSC-CXCL14上清液处理胰腺癌细胞后细胞内β-catenin及上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达显著高于CaPSC及CaPSC-shCXCL14组,差异具有统计学意义,以上效应可以被XAV-939显著抑制。结论化疗药物吉西他滨可以诱导胰腺癌星状细胞高分泌CXCL14进而以旁分泌的方式通过β-catenin-EMT信号通路促进胰腺癌细胞的侵袭转移,但对胰腺癌细胞的增殖影响不明显。提示吉西他滨联合CXCL14或β-catenin-EMT通路抑制剂有望成为胰腺癌治疗的新思路。
【图文】：

星状细胞,孔板,后放,提取法

吉西他滨诱导胰腺癌星状细胞高分泌 CXCL14 进而促进胰腺癌细胞侵袭转移的机制研究结果结果1.组织块提取法从新鲜的胰腺癌组织中提取胰腺星状细胞我们通过组织块提取法，将胰腺癌组织剪碎后放置 6 孔板板底，，加入相应培养基后在细胞培养箱内培养，一周左右可见大量成纤维样的胰腺星状细胞从胰腺癌组织块周围爬出（图 1）。

吉西他滨,ELISA检测,星状细胞,胰腺癌

结果吉西他滨诱导胰腺癌星状细胞高分泌 CXCL14 进而促进胰腺癌细胞侵袭转移的机制研究测分析发现吉西他滨处理过后的胰腺癌星状细胞 CXCL14 的分泌量较其他因子显著增强；进一步通过 Western Blot 检测发现 CXCL14 在吉西他滨处理过后的胰腺癌星状细胞中表达亦明显增高（图 2）。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9

【参考文献】