Spns2在胃癌组织的表达及其对胃癌细胞增殖和迁移的影响
发布时间：2020-03-27 11:09
【摘要】：背景胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。在我国,随着人口老龄化进程加快,以及生活压力和饮食习惯的改变,发病率居高不下并且逐步年轻化。部分胃癌患者在治疗过程中出现肿瘤细胞浸润及转移,最终导致死亡。深入研究胃癌的发生发展有重要的意义。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)是一种膜磷脂类分解和代谢产物,S1P是由鞘氨醇经由鞘氨醇激酶(Sphingosinekinase,SPHK)磷酸化产生,可通过自分泌或旁分泌的方式作用于细胞内或细胞外,产生一系列的免疫效应,同时也参与肿瘤相关活动包括细胞的增殖、迁移。除ABC家族外,鞘氨醇-1-磷酸转运体(spinsterhomologue 2,Spns2)也作为S1P的转运体参与S1P的转运。Spns2是一个有12个跨膜区域的蛋白质(含有504个氨基酸残基),2009年首先被发现于斑马鱼中,Spns2的缺失影响斑马鱼心肌元细胞迁移,导致其出现两个心脏。以往认为Spns2主要与免疫系统有关,如Shigetomo Fukuhara等[21]发现敲除Spns2可造成循环中S1P的浓度显著下降,从而导致成熟的T、B淋巴细胞聚集在胸腺,而血液和外周淋巴器官中淋巴细胞显著减少。与肿瘤相关研究少见报道,2016年Eric Bradley等[23]发现Spns2与非小细胞肺癌有关,敲除Spns2可以加快癌细胞迁移,首次揭示Spns2在非小细胞型肺癌细胞中具有调节作用。Spns2在胃癌中的相关研究未见报道,本实验旨在研究Spns在胃癌组织的表达及其过表达和下调对胃癌SGC-7901细胞生物学功能的影响。方法1.收集江苏省肿瘤医院胃外科术后胃癌/癌旁组织20对(男12,女8),通过免疫组化法检测比较Spns2蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达差异;2.构建过表达Spns2的pEX-l(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)真核载体和小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(以空载体质粒和无关序列siRNA分别作为阴性对照),转染人胃癌SGC-7901细胞,实验组分别命名为pEX-1-Spns2组/siRNA-Spns2组,对照组命名pEX-1组/siRNA-NC组,荧光显微镜观察转染效率。3.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分别检测转染后各组Spns2 mRNA和蛋白的表达水平,确认在胃癌细胞Spns2过表达和下调的效果;4.采用CCK-8、克隆形成实验、Transwell小室实验、划痕实验检测Spns2转染过表达质粒和siRNA对SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力的影响。结果:1.免疫组化显示20例胃癌和癌旁组织Spns2的表达强度分别(0.39±0.04)和(0.45±0.02),在胃癌组织表达低于正常组织(p0.05)。2.成功构建过表达Spns2的pEX-1(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)真核载体和siRNA,转染效率分别约为60%和75%。3.RT-PCR和Western blot结果显示转染过表达质粒后SGC-7901细胞的Spns2 mRNA和蛋白的表达水平均升高,转染siRNA后Spns2 mRNA和蛋白的表达均降低。4.和各自的阴性对照组相比,CCK-8结果显示,pEX-1-Spns2抑制SGC-7901细胞的增殖(p0.05),siRNA-Spns2促进增殖(p0.05);克隆形成实验结果显示,pEX-1-Spns2能够降低SGC-7901细胞的克隆形成率,而siRNA-Spns2能够提高克隆形成率;Transwell实验比较穿膜细胞数后显示,pEX-1-Spns2能够抑制SGC-7901细胞的迁移,而siRNA-Spns2能够促进迁移;划痕实验显示pEX-1-Spns2组细胞迁移率降低,siRNA-Spns2组细胞迁移率增加。结论:Spns2在胃癌组织中的表达低于癌旁正常组织的表达。上调Spns2的表达可有效抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移;下调Spns2的表达则作用相反。以上结果均提示Spns2在胃癌的发生中可能起到抑制作用,Spns2可成为胃癌早起检测或分子靶向治疗的新靶点。
【图文】：
Ｓｐｎｓ２的表达进行半定量，２０对胃癌／胃癌旁组织中，胃癌组Ｓｐｎｓ２蛋白表达逡逑（０．３９±０．０４）明显低于癌旁组（０．４５±０．０２），差异有统计学意义（ｐ＜０．０５）。逡逑见图１。逡逑Ａ逦廔逡逑０．５５－１邋ｃ逡逑０．５０－逦■逡逑０．４５－逦：逡逑０．４０－逦逦云—逡逑０．３５－逡逑０．３０－１逦１逦１逦逡逑胃癌逦Q懓┡藻义希粒何赴┳橹捅泶铮诲危拢何赴┡宰橹弑泶镥义希酶髯橹瓯久庖咦榛樱穑睿螅脖泶锇攵浚桑希闹靛义贤迹蔽赴┘鞍┡宰橹校樱穑睿螅驳谋泶锴榭觯ǎ牛欤椋觯椋螅椋铮铄澹穑欤酰蠓ǎ荆迹，
本文编号：2602881
【图文】：
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