碳量子点负载阿霉素靶向攻击细胞核治疗癌症的研究

发布时间：2020-04-03 19:36

【摘要】：化学疗法广泛应用于多种癌症的治疗。然而,化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时也会杀伤正常细胞,导致副反应的发生。化疗药物的低针对性和破坏性是目前急需突破的问题。近年来,碳量子点因其良好的荧光性、生物相容性及低毒性,在癌症治疗领域引起了研究人员的广泛关注。目前关于碳量子点作为生物医学传送系统负载药物治疗疾病的研究较为深入,但在口腔肿瘤疾病治疗方面的应用鲜有报道,而口腔肿瘤疾病对化疗药物并不敏感。目的:制备碳量子点,将碳量子点与阿霉素结合,制备形成一种新型载药复合体,探讨他们的理化性能;比较载药复合体与单纯阿霉素的抗肿瘤效率,初探载药复合体的作用机制。方法:第一部分:碳量子点、碳量子点负载阿霉素复合体的制备及理化性能检测通过牛奶水热法制备碳量子点。将碳量子点与盐酸阿霉素在摇床中避光孵育24h得到载药复合体。通过紫外光照射、荧光吸收辐射光谱、紫外吸收光谱、接触角检测、Zeta电位检测、FT-IR、XPS、XRD等表征碳量子点及载药复合体的理化性能;通过TEM、SEM、AFM展示碳量子点及载药复合体形态。第二部分:载药复合体的体外药效实验通过DOX的荧光标准曲线计算载药复合体中DOX的负载率;将载药复合体至于pH 7.4、pH 6.8、pH 5.0环境进行药物释放实验,绘制DOX的释放曲线。使用L929细胞和ACC-2细胞进行细胞毒性检测、药物定位、细胞对药物的摄取以及药效的检测。CCK-8毒性检测,检测碳量子点的毒性、两种药物分别对两种细胞的药效;共聚焦显微镜,观察药物在ACC-2细胞中的定位;流式细胞仪,检测两种药物对细胞凋亡周期的影响。结果:第一部分:碳量子点、碳量子点负载阿霉素复合体的制备及理化性能检测本实验制备的碳量子点为球状结构,接触角为10.4°,具有良好的亲水性,Zate电位结果显示碳量子点带负电,形态学检测及理化性能检测结果证明碳量子点的成功制备。结合阿霉素后紫外光谱及吸收辐射光谱波峰发生蓝移、FT-IR、XPS图谱显示有新的C-N化学键形成,证明载药复合体的成功制备。第二部分:载药复合体的体外药效实验DOX的负载率约为87%。DOX在pH 5.0的环境中释放率最高。在72h前释放速度较为缓慢。CCK-8结果显示碳量子点对L929细胞具备低毒性,在一定浓度范围几乎无毒性,可以应用于实验;载药复合体对ACC-2的杀伤作用强于单纯阿霉素的杀伤效率,对L929的杀伤效率低于单纯阿霉素;共聚焦显微镜观察显示载药复合体将阿霉素更多送入ACC-2细胞细胞核;流式细胞凋亡周期检测同时发现,相比单纯阿霉素,载药复合体作用于ACC-2细胞,处于凋亡晚期的细胞比例增高。使用GraphPad Prism 6.0软件的t检验分析数据。结论:1.相比传统制备方法,碳量子点制备工艺绿色环保,具备良好的荧光性,低毒性,生物相容性好;2.碳量子点与载药复合体表征结果的区别,证明载药复合体的成功制备。载药复合体的药物释放具备pH依赖性。3.载药复合体对ACC-2肿瘤细胞表现出特异性和敏感性,对L929正常细胞表现出低毒性。4.载药复合体主要通过细胞核靶向作用和凋亡途径杀伤肿瘤细胞,提高抗肿瘤效率。
【图文】：

接触角,溶液,培养基

逡逑接触角实验测得，碳量子点接触角度约为１０．４°邋（图２）。逡逑Ｉ逡逑逦ｕ邋逦？逡逑图２碳量子点溶液的接触角逡逑碳量子点溶液分别与ＰＢＳ、ＲＰＭＩ邋１６４０培养基、含１０％邋ＦＢＳ的ＲＰＭＩ邋１６４０培逡逑养基混合，观察３天后、７天后溶液的混合情况，发现四组溶液均混合良好、无沉逡逑淀、分层现象。（见图３）逡逑ｆＹｊＯｖｌ）逡逑３天逡逑７天逡逑图３碳量子点在ＰＢＳ、ＲＰＭＩ培养基、含胎牛血清的ＲＰＭＩ培养基中的稳定性逡逑１６逡逑

培养基,胎牛血清,稳定性,溶液

碳量子点溶液分别与ＰＢＳ、ＲＰＭＩ邋１６４０培养基、含１０％邋ＦＢＳ的ＲＰＭＩ邋１６４０培逡逑养基混合，观察３天后、７天后溶液的混合情况，发现四组溶液均混合良好、无沉逡逑淀、分层现象。（见图３）逡逑ｆＹｊＯｖｌ）逡逑３天逡逑７天逡逑图３碳量子点在ＰＢＳ、ＲＰＭＩ培养基、含胎牛血清的ＲＰＭＩ培养基中的稳定性逡逑１６逡逑
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R730.5

【参考文献】