Stathmin影响胃癌作用的分子机制研究

发布时间：2020-04-11 04:45

【摘要】：目的:在全球范围内,胃癌作为第五大常见恶性肿瘤,严重威胁到人类的健康。胃癌的发病率和死亡率均较高、预后差,这与它的深侵袭性、高转移率、快速增殖、高复发率密切相关。以往的研究证实,Stathmin在胃癌的发生、发展和预后中起着重要作用。然而,Stathmin影响胃癌的发病及转移机制尚不明确。在本研究中,我们运用同位素标记的相对和绝对定量技术(iTRAQ)寻找与Stathmin影响胃癌作用相关的蛋白,进而探究STMN在胃癌发生发展过程中的分子作用机制。方法:本研究先通过组织芯片进行免疫组化染色,在组织水平验证STMN在胃癌组织和癌旁组织的差异表达。然后利用小干扰RNA技术特异性的下调AGS和MKN-28胃癌细胞中STMN蛋白的表达,再观察胃癌细胞生物学功能的改变。再收集AGS、MKN-28两种胃癌细胞STMN表达下调前后的分泌蛋白,运用了iTRAQ技术及质谱分析,对胃癌细胞蛋白进行定量蛋白质组学研究,筛选出AGS、MKN-28两种胃癌细胞STMN表达下调前后差异表达的蛋白,再根据文献检索分析,从iTRAQ筛选出的蛋白中选择几个蛋白分子,运用免疫印迹、实时定量PCR验证这些蛋白分子在蛋白水平、RNA水平的差异表达情况,以此探究STMN影响胃癌作用的可能分子机制。结果:我们的数据表明,Stathmin在胃肿瘤组织中过度表达,而且STMN在胃癌细胞的表达下调后,胃癌细胞的迁移、侵袭、增殖能力均明显降低,且凋亡增多。经过iTRAQ技术及质谱分析,共筛选出96个差异表达的蛋白质,其中45个蛋白显著上调,51个蛋白显著下调。通过免疫印迹、实时定量PCR实验,验证了sCLU,CST3,CTSD,MMP1,MMP9,CDK1,HSP90,SOD1等蛋白的差异表达,其结果与iTRAQ结果一致。据质谱结果及文献检索分析,进一步验证AKT和STATs等通路蛋白的活性,发现对STMN的表达抑制降低了AKT和STATs等通路蛋白的活性。结论:本研究中验证了STMN在胃癌组织中高表达,且STMN在胃癌细胞的差异表达能显著影响胃癌细胞的生物学功能。我们通过进一步的验证发现,对STMN的抑制降低了胃癌细胞中AKT和STATs等通路蛋白的活性,可能引起胃癌细胞Clusterin、Cystatin c和MMPs的表达水平降低,进而使胃癌细胞增殖、迁移侵袭能力减弱。
【图文】：

胃癌组织,免疫组化分析,胃癌细胞,免疫组化染色

22图 1. 免疫组化分析 stathmin 在胃癌组织及癌旁组织的表达Figure 1.Immunohistochemistry (IHC) assay for STMN.(A)Representativeimmunohistochemistry images of STMN in GC tumor tissue and adjacent non-cancerousgastric tissue. (B) Corresponding IHC score values of STMN were significantly higher intumor tissues than in non-tumor adjacent tissues.*P<0.01.3.2 STMN 对胃癌细胞生物学功能的影响如免疫组化染色结果所示，，STMN 在胃癌组织中高表达。现我们进一步探

胃癌细胞

25图 3.STMN 对胃癌细胞的迁移、侵袭的影响Figure 3. STMN plays a critical role in GC cell migration and invasion. (A and B)Comparisonof the migration ability of GC cell lines with and without STMN knockdown by wound healingassays.(C)Differences in the invasive capability of AGS and MKN-28 cells between STMNknockdown and the controls, as assayed by transwell assays.*P<0.05.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

【参考文献】