EBV阳性弥漫大B细胞淋巴瘤的临床特征及二代组学研究

发布时间：2020-04-18 18:37

【摘要】：目的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是一种最常见的非霍奇金淋巴瘤,EBV阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤(非特指型)(EBV~+DLBCL,NOS)是近年来DLBCL的新亚型;化疗效果差,总体预后不良。本课题拟研究分析EBV~+DLBCL患者临床特点、预后及其相关的二代组学分子学特征,以期为探讨今后潜在的临床治疗提供数据。方法1、病例:收集2013年3月至2017年6月间国内16家医疗中心血液科收治的具有完整病例资料且年龄大于16周岁的初治DLBCL患者600例。(1)对400例≤60周岁的年轻患者进行随机分组,根据蒽环类药物使用的不同剂量分成R-CHOP-50组(美罗华、环磷酰胺、长春新碱、阿霉素、泼尼松)、R-CEOP-70组(美罗华、环磷酰胺、长春新碱、表阿霉素、泼尼松)、R-CEOP-90组;(2)将200例60周岁的患者随机分入R-CHOP-50及R-CEOP-70组。对262例患者进行EBER(Epstein-Barr encoded RNAs-1)探针原位杂交,检测淋巴瘤组织中EB病毒的表达;192例患者进行实时荧光定量PCR(qPCR)检测外周血EB病毒DNA拷贝数及血清EB病毒DNA拷贝数;256例患者进行酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清EBV抗体谱(Rta-IgG,VCA-IgG,EBNA-IgG,VCA-IgA,EA-IgM)的表达;并通过SPSS 21.0对患者的临床特征及总生存期(overall survival,OS)、无进展生存期(progress free survival,PFS)进行统计分析。2、对122例患者进行全基因组(WGS)或全外显子(WES)测序,对75例患者进行靶向访问阵列芯片测序;根据EBV状态分组,进行基因突变分析和KEGG通路富集。结果1、在检测EBER的262例患者中,EBER阳性的DLBCL患者有25例(25/262,9.54%),外周血EB病毒DNA拷贝数阳性的患者有40例(40/192,20.83%),血清EB病毒DNA拷贝数阳性的患者有15例(15/192,7.81%)。2、不论是EBER阳性患者还是EBV DNA拷贝数阳性患者,较EBER阴性患者及EBV DNA拷贝数阴性患者均在临床特征上未见显著性差异;EA IgG~+DLBCL较EA IgG~-DLBCL更倾向发生于年轻女性(p=0.0406,p=0.0061),EBNA IgG~+DLBCL较EBNA IgG~-DLBCL患者则更多见于non-GCB表型患者(p=0.0323),VCA IgA~+DLBCL患者常伴随较高的AA分期、IPI评分及LDH水平(p=0,0204,p=0.0156,p=0.0027)。3、EBER~+DLBCL患者较EBER~-DLBCL患者具有更差的预后(平均生存:33.64月VS 47.52月,PFS:p=0.0020,OS:p0.0001);外周血EBV DNA阳性DLBCL患者与外周血EBV DNA阴性DLBCL患者在全年龄组患者中预后无显著性差异,但在老年组患者中其生存具统计学差异,其阳性患者具有更差的预后(PFS:p=0.0274,OS:p=0.0259);而血清EBV DNA阳性DLBCL、VCA IgA~+DLBC患者较血清EBV DNA阴性DLBCL、VCA IgA~-DLBCL患者在年轻组患者中PFS显著缩短(p=0.004、p=0.042),而在其他年龄组上无显著差异。此外EBNA IgG~+DLBCL患者较EBNA IgG~-DLBCL在年轻组PFS有延长趋势。不论是EBER~+DLBCL患者,还是EBNA IgG~+DLBCL、VCA IgA~+DLBCL患者,均在接受R-CEOP-90治疗组中较R-CHOP-50/R-CEOP-70组具有更好的预后。4、对二代测序结果中基因突变频率大于5%,且文献报道过的与DLBCL相关的基因进行分析,结果显示EBER~+DLBCL及EBER~-DLBCL在PIK3CA(27.3%VS 4.6%,p=0.0016)、TNFAIP3(18.2%VS 5.1%,p=0.0427)、PIK3CD(18.2%VS5.1%,p=0.0319)等基因突变上存在显著性差异;KEGG分析显示两者在NOTCH通路(36.36%VS 12.57%,p=0.0081)、JAK-STAT通路(45.45%VS 18.29%,p=0.0146)、BCR通路(22.73%VS 6.29%,p=0.0209)及NF-κb通路(36.36%VS 10.29%,p=0.0029)上存在显著性差异。结论EBV~+DLBCL不仅在其临床特征及预后上与EBV~-DLBCL存在显著性差异,且在相关分子通路上(NOTCH通路,JAK-STAT通路,BCR通路及NF-κb通路)也存在着显著性差异,在临床治疗上,提高蒽环类药物的剂量也许可以克服EBV感染相关的DLBCL的不良预后。
【图文】：

韦恩图,检测方法,阴性,拷贝数

表 2 EBV 抗体谱与 EBER 及 EBV DNA 拷贝数相关性分析EBV DNA 拷贝数EBER外周血血清阳性阴性 p 值阳性阴性 p 值阳性阴性 p 值EA IgG阳性 6 45 0.3763 14 36 0.3186 3 42 1.0000阴性 9 115 27 108 12 126VCA IgG阳性 15 158 1.0000 42 144 0.2299 15 167 1.0000阴性 0 2 1 0 0 1EBNA IgG阳性 15 148 0.6028 36 130 0.3084 15 157 0.6036阴性 0 12 1 12 0 11图 1 不同 EBV 检测方法韦恩图注：相交处表示同时进行了两种或者三种 EBV 检测方法

预后分析,患者

31图 2 EBER 相关的预后分析图 A、B 为全部患者中 EBER+DLBCL 患者和 EBER-DLBCL 患者的 PFS/OS。图 C、D 为老年组EBER+DLBCL 患者和 EBER DLBCL 患者的 PFS/OS。图 E、F 为年轻组 EBER+DLBCL 患者和EBER DLBCL 患者的 PFS/OS 分析。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.1

【参考文献】