2-苯甲酰基吡啶铑（Ⅱ）配合物诱导肝癌细胞HepG2凋亡和G1期阻滞及其作用机制

发布时间：2020-04-21 20:16

【摘要】：目的:肝癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,严重影响着人类的健康。目前肝癌治疗大多是采取手术切除、放疗、化疗等综合治疗。但由于目前化疗药物的耐药性、副作用及预后差等一系列原因,新型抗肿瘤药物的研发十分必要。自从顺铂被合成后,作为抗肿瘤药物应用于临床,金属配合物便开始备受关注。2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物是一种新型的、具有生物活性的金属配合物,但其抗肿瘤效果及其作用机制尚不清楚,本文主要研究该新型金属配合物对肝癌细胞增殖、凋亡及周期的影响及其分子机制。方法:1、采用MTT筛选出对2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物作用较为敏感的肝癌细胞株;2、利用MTT、平板克隆形成实验检测2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物作用后对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用;3、采用流式细胞技术检测2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物作用后肝癌细胞的凋亡和周期阻滞的情况;4、Hoechst染色和JC-1染色观察2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物作用后肝癌细胞凋亡的形态学改变;5、活性氧染色检测2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物作用后的肝癌细胞内活性氧的水平及是否存在活性氧依赖关系;6、采用Western Blotting技术检测药物作用后,肝癌细胞的凋亡相关因子和周期阻滞相关因子的表达。结果:1、MTT法筛选出对2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物敏感的肝癌细胞株HepG2细胞。2、2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物对HepG2细胞增殖的抑制作用具有时间依赖和浓度依赖关系。3、40μM的2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物作用于肝癌细胞48h后,流式检测2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物能明显诱导HepG2凋亡,与对照组差异显著(P0.05),Hoechst染色可见2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物诱导HepG2细胞核固缩,JC-1染色可见细胞凋亡后,线粒体外膜电势降低,除此之外,活性氧检测发现细胞内活性氧水平明显升高,但2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物诱导HepG2的凋亡不依赖活性氧的产生。4、Western Blotting实验表明,线粒体信号通路和死亡受体信号通路参与了2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物诱导HepG2细胞的凋亡,并且Bcl-2家族也参与了2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物诱导HepG2细胞凋亡的过程;另外,2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物可能通过上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21,下调细胞周期蛋白CyclinD1/CyclinA1/CyclinE1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2/CDK6的表达,引起细胞周期阻滞在G1期。结论:2-苯甲酰基吡啶铑(II)配合物是一种潜在的新型抗肝癌药物,能够引起HepG2细胞周期阻滞在G1期;并且通过线粒体信号通路和死亡受体信号通路诱导肝癌细胞HepG2凋亡。
【图文】：

信号通路,凋亡信号,线粒体,Bcl-2家族

作用于HepG2细胞48h后，actived-caspase-3和cleaved-PARP表达增加，，而pro-caspase-3和Survivin(目前发现的最强的凋亡抑制因子)表达降低。如图5B/C所示，Rh(L)2Cl2不但增加了线粒体通路中Apaf-1, caspase-9和细胞质中cytochrome-c的表达，而且增加了死亡受体通路中caspase-8、Fas的表达。这表明线粒体通路信号和死亡受体通路信号都参与Rh(L)2Cl2诱导HepG2的凋亡。已有研究表明，Bcl-2家族在线粒体信号通路中发挥了重要作用，因此我们探讨的Bcl-2家族中凋亡抑制因子Bcl-2和促凋亡因子Bax的表达。结果如图5D所示，Bcl-2的表达明显降低，而Bax的表达明显增加。这些数据证实，Bcl-2家族参与了Rh(L)2Cl2诱导HepG2
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7

【参考文献】