关于miR-638在胃癌发展中的作用和机制的研究

发布时间：2020-05-05 00:58

【摘要】：目的:胃癌是引起癌症相关死亡的主要疾病之一。一些微小核糖核酸(miRNA)已被证实在胃癌的生长和侵袭中发挥着至关重要的作用。本研究主要为了验证miR-638在胃癌中的主要作用,探究其潜在的靶基因,以及发挥作用的具体机制。方法:我们通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了胃癌患者癌与癌旁的组织样本中miR-638的表达水平,同样也检测了胃癌细胞株SGC-7901和SC-M1中miR-638的含量。通过细胞流式技术检测分析细胞周期,运用CCK-8检测细胞增殖情况,通过Transwell细胞体外侵袭实验评估实验细胞的侵袭力变化。进一步地,使用生物信息技术预测miR-638的潜在靶基因,并联合q RT-PCR和蛋白免疫印迹法在RNA和蛋白水平对SOX2进行了验证。而后采用荧光素酶报告基因实验检验miR-638对SOX2是否存在靶向抑制的作用。最后利用SOX2的小干扰RNA验证miR-638、SOX2以及胃癌发生发展的关系。结果:miR-638在胃癌患者癌组织中的表达水平相较于癌旁组织中是下降的,并且其含量和胃癌TNM分期以及淋巴转移情况呈现负相关性。而在胃癌细胞的体外实验中我们发现,miR-638含量的下降可以促进胃癌细胞的增殖能力和侵袭能力、干扰细胞周期变化。而转录因子SOX2在胃癌组织中呈高表达,与miRNA-638的含量呈负相关性。通过直接与SOX2基因3’末端非翻译区结合,过表达的miR-638可以有效抑制转录因子SOX2的表达。而通过小干扰RNA抑制SOX2的表达可以在一定程度上逆转miRNA-638下调对胃癌细胞株增殖能力和侵袭能力的促进作用。结论:本研究表明miRNA-638在胃癌的发生发展中起着抑癌因子的作用,其低表达会引起转录因子SOX2的上调,继而促进胃癌细胞的增殖和侵袭能力。
【图文】：

癌组织中相对表达量为 5.637±1.214，而癌旁组织中为 11.220±3.148（p <0.05, 图1B）。图 1： miR-638 在胃癌患者组织标本中呈下调趋势（A）使用 qRT-PCR 检测 68 例胃癌患者的癌和癌旁组织中的 miR-638 的含量；（B）miR-638 的平均相对表达水平分析；（C）68 例中有 50 例癌组织中的 miR-638 含量较癌旁组织中显著降低。（*，P < 0.05）如表格 1 所示，我们对胃癌组织中 miR-638 的相对表达水平和患者的临床病例特征做了相关性分析。先将 68 例样本所测得的 miR-638 相对表达量由低到高排序，而后分为中位数以下的低表达组和中位数以上的高表达组，再将其与临床特征结合进行

10图 2：miR-638 具有抑制胃癌细胞增殖，，诱导细胞阻滞的作用（A）在胃癌细胞株中转染 miR-638 模拟物（mimics）、抑制物（inhibitor）以及相应的对照分子（mimics-NC, inhibitor-NC）后进行转染效率检测；（B）使用 CCK-8在不同时间点检测转染过后的胃癌细胞活性，绘制生长曲线；（C）使用流式细胞仪检测并分析转染 miR-638 模拟物和抑制物对胃癌细胞周期的影响；（D）对不同周期阶段的细胞数进行比较。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

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本文编号：2649260