ABAT在乳腺癌中的作用及机制研究

发布时间：2020-05-20 17:32

【摘要】：目的研究乳腺癌中4-氨基丁酸氨基转移酶(4-aminobutyrate aminotransferase,ABAT)的表达并分析其表达水平与患者预后的关系;分析ABAT的表达水平与Estroten Receptor(ER)的表达水平是否具有相关性,并进一步研究ABAT的表达水平对乳腺癌细胞迁移和增殖能力的影响,以及初步探讨ABAT影响乳腺癌患者预后的作用机制。方法通过基因表达谱的乳腺癌患者预后在线预测网站(Gene expression-based Outcome for breast cancer Online,GOBO)数据库预测ABAT与乳腺癌患者预后的关系,并采用免疫组化分析乳腺癌组织中ABAT和ER表达水平,采用SPSS软件行卡方检验进行ABAT和ER表达之间相关性的统计学分析以及通过绘制Kaplan-Meier生存曲线和行log-rank检验来分析ABAT的表达水平对ER阳性乳腺癌患者的预后作用。根据ER的表达水平,我们选择ER阳性的MCF 7乳腺癌细胞系和ER阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞系作为本实验研究模型。采用Western Blotting检测乳腺癌细胞中ABAT和ER蛋白表达水平。ABAT干扰质粒(ABAT siRNA)由锐博生物(中国广州)化学合成。ABAT过表达质粒由我们课题组成功构建。用慢病毒感染的方法将ABAT过表达的病毒感染MDA-MB-231乳腺癌细胞系,然后用Western-blot分别验证ABAT是否成功的表达下调或上调。我们采用MTT细胞增殖和Transwell小室细胞迁移等体外细胞学实验来观察ABAT的表达水平的改变是否对乳腺癌细胞的迁移和增殖产生影响。为了进一步验证体外细胞学实验的结果,我们通过构建免疫缺陷小鼠成瘤实验来进行体内动物实验进行验证。结果1、在线数据库GOBO数据库的预测结果为ABAT的表达水平与乳腺癌预后相关。我们通过对乳腺癌组织进行免疫组织化学染色,结果显示ER阳性的乳腺癌样本中,ABAT高表达,ER阴性的乳腺癌样本中,ABAT低表达。即ABAT的表达水平与ER的表达水平呈正相关(P0.05)。Kaplan-Meier曲线结果显示:在ER阳性的乳腺癌患者中,ABAT低表达患者与ABAT高表达患者相比有较低的无病生存率(P=0.001)和总生存率较低(P=0.002)。ABAT高表达是乳腺癌患者预后良好的指标之一。2、体外细胞学实验也同样证实ABAT在ER阳性的MCF 7乳腺癌细胞中高表达,在ER阴性的MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3乳腺癌细胞系中低表达。3、MTT细胞增殖实验结果显示在MCF 7乳腺癌细胞中,将ABAT干扰后,ABAT降表达组与对照组相比,细胞的增殖能力增高;在MDA-MB-231乳腺癌细胞中,将ABAT过表达后,ABAT过表达组与对照组相比,细胞的增殖能力降低。Transwell小室细胞迁移实验结果显示在MDA-MB-231乳腺癌细胞中ABAT过表达组穿过基质膜的能力增强。4、裸鼠体内实验结果显示注射稳定转染ABAT过表达的MDA-MB-231乳腺癌细胞组和对照组相比,小鼠肿瘤的生长能力降低。免疫组化结果显示在MDA-MB-231乳腺癌细胞中,ABAT蛋白过表达组与对照组相比,ABAT的表达水平上升,Ki67蛋白和EGFR蛋白的表达水平都降低。5、ER阳性的乳腺癌细胞系中,ABAT蛋白的表达下调会降低内分泌治疗的敏感性。结论在乳腺癌中ABAT蛋白的表达水平与ER的表达水平呈正相关,在ER阳性的乳腺癌组织中高表达,在ER阴性的乳腺癌组织中低表达。ER阳性的乳腺癌组织中高表达ABAT蛋白或许是预后良好的指标之一。ABAT蛋白的表达上调可以抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖能力。ABAT蛋白的表达下调可能会引起ER阳性乳腺癌患者的内分泌耐药。ABAT蛋白是否可做为ER阳性乳腺癌新的治疗靶点还有待进一步研究。
【图文】：

图 1. GOBO 数据库预测结果同分子分型（基因检测的方法）乳腺癌组织中 ABAT 表达情况；B）不同分子M50 分类）乳腺癌组织中 ABAT 表达情况；C）不同 ER 状态乳腺癌组织中 AB况；D）不同组织学分级乳腺癌组织中 ABAT 表达情况2 ABAT 高表达与乳腺癌患者预后呈正相关我们通过在线 GOBO 数据库来预测 ABAT 蛋白的表达是否会影响乳腺预后，GOBO 预测显示，在总体人群中 ABAT 高表达的乳腺癌患者有远处转移存活率（Distant metastasis-free survival, DMFS）（P=9e-05，图未行他莫西芬治疗的患者而言同样是高表达 ABAT 蛋白的乳腺癌患者 DMFS（P=0.03972，图 1F），对于行他莫西芬治疗的乳腺癌患者而言 DMFS 高表达的患者有较高的 DMFS （P=0.03972，图 1G）。这说明者无论是否进行他莫西芬治疗，高表达 ABAT 蛋白的患者预后要明显T 低表达的乳腺癌患者，这提示 ABAT 蛋白的高表达是乳腺癌患者预

图 1. GOBO 数据库预测结果E）ABAT 表达对乳腺癌患者 DMFS 的影响预测结果；F）ABAT 表达对未行 TAM 治疗乳腺癌患者 DMFS 的影响预测结果；G）ABAT 表达对行 TAM 治疗乳腺癌患者 DMFS 的影响预测结果1.2.3 ABAT 的表达与 ER 的表达呈正相关通过利用 GEPIA 网站数据库来进行 TCGA 数据库预测 ER 与 ABAT 蛋白表达的相关性，进行 Pearson 相关性检验，结果发现 ABAT 蛋白的表达水平与 ESR1（ER）的表达状态呈正相关（P<0.001，R=0.46），即 ABAT 蛋白在 ER 阳性的乳腺癌组织中高表达，在 ER 阴性的乳腺癌组织中低表达。结果见图 2 所示。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

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本文编号：2672960