金属蛋白酶ADAMTS18与胃癌预后相关性分析及其对胃癌生物学功能的影响研究

发布时间：2020-05-22 05:58

【摘要】：研究内容:本研究分为三个章节:1、基于TCGA数据库对金属蛋白酶ADAMTS18与胃癌临床预后的关系研究;2、ADAMTS18基因与胃癌临床病理特征的关系研究;3、ADAMTS18基因沉默及过表达对胃癌细胞生物学行为的影响。第一章基于TCGA数据库对金属蛋白酶ADAMTS18与胃癌临床预后的关系研究目的:探讨金属蛋白酶ADAMTS18在胃癌中的表达及临床价值,预测ADAMTS18调控肿瘤发生发展可能的机制。方法:从在线分析工具GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)获取胃癌组织与胃正常组织ADAMTS18基因表达水平差异。从癌症基因数据库(the cancer genome atlas,TCGA)收集胃癌患者基因表达谱和临床病理资料数据集,分析ADAMTS18基因表达水平与患者临床病理参数的相关性,并利用Kaplan-Meier乘积极限法和Cox比例风险回归模型分析其对患者临床预后的影响。利用Gene MANIA和STRING在线数据库构建ADAMTS18基因、蛋白相互作用网络,并富集分析ADAMTS18基因参与肿瘤发生发展可能涉及的基因和相关信号通路。结果:ADAMTS18基因在胃癌组织中表达水平明显高于其在正常胃组织中表达水平。ADAMTS18基因m RNA在胃癌组织中的表达水平与肿瘤分级显著相关(P0.001),ADAMTS18基因表达量越高,肿瘤分级越高,恶性程度越高。ADAMTS18表达越高预后越差,生存期越短(P=0.002 HR=1.809,95%CI=1.236-2.649)。ADAMTS18基因富集分析涉及到细胞外基质重塑、肿瘤坏死因子反应、金属肽酶活性等相关基因集。结论:ADAMTS18基因高表达是胃癌患者术后预后不良因素,可作为判断患者不良预后的生物学标志物。第二章ADAMTS18基因与胃癌临床病理特征的关系研究目的:探讨ADAMTS18基因在胃癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理参数的相关性。方法:收集2016年10月至2017年2月广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科胃癌患者经手术治疗和病理诊断为胃癌的癌组织和癌旁组织40对以及相应的临床病理资料,以免疫组化法检测ADAMTS18蛋白在胃癌组织及癌旁组织表达水平,以Trizol法提取癌组织和癌旁组织总RNA,实时荧光定量PCR检测ADAMTS18 m RNA表达水平,并分析癌组织中ADAMTS18mRNA表达水平与临床病理参数相关性。结果:免疫组化法证明胃癌组织中ADAMTS18蛋白显著高于癌旁组织(P0.001),胃癌组织中ADAMTS18基因m RNA表达水平显著高于癌旁组织(P=0.001),ADAMTS18基因m RNA表达水平与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P=0.013,P=0.001,P=0.001)。结论:ADAMTS18基因m RNA和蛋白在胃癌组织中表达水平显著升高,且胃癌组织中ADAMTS18表达水平与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期显著相关。第三章ADAMTS18基因沉默及过表达对胃癌细胞生物学行为的影响目的:探讨ADAMTS18基因沉默及过表达对胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭力的影响。方法:利用慢病毒介导的基因沉默和过表达技术,在胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803中构建ADAMTS18基因沉默和过表达的稳转株,实时荧光定量PCR和Western Blot检测ADAMTS18过表达和沉默效率,MTT法实验检测胃癌细胞ADAMTS18基因沉默和过表达后对细胞增殖能力的影响,划痕实验、Transwell实验检测ADAMTS18基因沉默和过表达后对胃癌细胞系的迁移及侵袭能力的影响。结果:成功构建ADAMTS18基因沉默和过表达的胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803稳转株,MMT法实验显示ADAMTS18基因沉默后胃癌细胞SGC-7901和MGC-803增殖能下降,划痕实验、Transwell实验表明ADAMTS18沉默后胃癌细胞SGC-7901和MGC-803迁移和侵袭能力减弱,而相反ADAMTS18基因过表则达促进胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803的增殖、迁移和侵袭能力。结论:慢病毒介导的ADAMTS18基因沉默抑制胃癌细胞系体外增殖、迁移和侵袭能力;ADAMTS18过表达促进胃癌细胞系体外增殖、迁移和侵袭能力。
【图文】：

散点图,正常组织,人体,基因

SPSS22.0 统计学软件被用来统计学分析。GraphPad Prism v.5.0 用来作基因表达散点图，临床病理相关性分析采用χ2检验及 Fisher 确切概率Kaplan-Meier 乘积极限法和 log-rank 检验法来进行生存分析，COX 比例险回归模型进行多因素分析，P< 0.05 认为有统计显著性。2 结果2.1 胃癌组织与胃正常组织中 ADAMTS18 基因表达差异从在线分析工具 GEPIA 获得胃癌组织与胃正常组织表达差异分析果，纳入分析胃癌组织 408 例，正常胃组织 211 例。结果显示 ADAMT基因在胃癌组织中明显高表达，但结果却显示与正常胃组织中 ADAMT基因表达水平比较，差异无统计学显著性（图 1-1）。

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图 1-2 TCGA 数据库中基因 ADAMTS18 表达散点图Figure1-2 Scatter plots ofADAMTS18 expression level in TCGA18 基因表达与临床病理学参数相关性数据库总共纳入 300 例各项临床病理资料都完整例，女性 109 例，，年龄 30-90 岁，中位年龄为 67 岁与胃癌患者临床病理特征的关系见表 1-1。分析
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

【参考文献】