NF-κB、MAPK通路介导褪黑素对胃荷瘤小鼠T细胞活化的影响

发布时间：2020-05-23 18:59

【摘要】：褪黑素是一种主要由松果体合成,参与调节机体免疫、代谢、昼夜节律等生理活动的神经内分泌激素。褪黑素在肿瘤的发生发展过程中起重要的免疫调控作用,但其对胃癌的肿瘤免疫调节作用及机制尚未明确。研究目的本研究旨在建立去松果体、胃荷瘤小鼠模型,通过流式细胞术、Real time RTPCR、Western Blot、免疫组织化学技术等技术手段,探讨褪黑素干预后,对胃荷瘤小鼠的免疫调控作用与机制。研究方法1.运用HE染色法、免疫组化技术检测胃荷瘤小鼠胃组织的病理变化。2.运用流式细胞术检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠脾细胞中CD4、CD8a、CD38、CD69、perforin、Granzyme B、CD26、CD278、I-A/I-E表达变化。3.运用CBA法检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠血浆中IFN-γ、TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A含量变化。4.运用Real time PCR检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠胸腺、脾脏组织T细胞活化及MAPK信号通路相关分子Elk-1、JNK、LAT、NF-κB、p38 m RNA水平的变化。5.运用Western Blot检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠胸腺、脾、胃组织Elk-1、p-JNK、LAT、NF-κB、p38、ERK1/2蛋白的表达。6.运用免疫组化技术检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠脾脏组织p-JNK、LAT、NF-κB、p38、ERK1/2表达的变化。研究结果1.石蜡切片HE染色结果及免疫组化结果显示:去松果体、胃荷瘤小鼠模型构建成功。2.流式细胞术结果显示:10、20mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD4、CD26、CD69、CD278、I-A/I-E表达量均明显下调,10mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD38表达量下调,CD8a、Granzyme B表达量上调,20mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD38表达量上调,Granzyme B、perforin表达量下调,40mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD4、CD8a、CD26、CD38、Granzyme B、I-A/I-E、perforin表达量上调,CD69表达量下调。3.CBA结果显示:10mg/kg剂量组小鼠血浆中IFN-γ、TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10含量下调,40mg/kg剂量组小鼠血浆中TNF、IL-6、IL-10含量上调。4.Real time PCR结果显示:在胸腺组织中,10mg/kg剂量组NF-κB mRNA表达量下调,20mg/kg剂量组Elk-1、JNK、NF-κB、p38m RNA表达量均上调。在脾脏组织中,10mg/kg剂量组Elk-1、LAT、p38 m RNA表达量上调。5.Western Blot结果显示:在胸腺组织中,10mg/kg剂量组p-JNK蛋白表达量上调,LAT、NF-κB、p38蛋白表达量下调,20mg/kg剂量组Elk-1、NF-κB蛋白的表达量上调,40mg/kg剂量组Elk-1、LAT、NF-κB、p38蛋白的表达量下调。在脾脏组织中,10mg/kg剂量组Elk-1、p38蛋白表达量下调,p-JNK、NF-κB蛋白表达量上调,20mg/kg剂量组p-JNK、LAT蛋白表达量上调,40mg/kg剂量组Elk-1蛋白表达量下调,LAT、NF-κB、p38蛋白表达量上调。在胃组织中,10mg/kg剂量组p-JNK蛋白表达量上调,20mg/kg剂量组p-JNK蛋白表达量下调,40mg/kg剂量组Elk-1蛋白表达量上调,p-JNK、LAT蛋白表达量下调。6.脾脏组织免疫组化结果显示:10mg/kg剂量组p38表达量下调、ERK1/2表达上调,20mg/kg剂量组p-JNK、LAT、ERK1/2表达上调,40mg/kg剂量组LAT表达下调。结论NF-κB、MAPK信号通路介导褪黑素对胃荷瘤小鼠T细胞的活化过程。
【图文】：

A B图 1 摘除的松果体组织石蜡切片 HE 染色，箭头示松果体细胞A 放大倍数×200 B 放大倍数×400Fig1 mouse HE staining of pineal gland. Arrows indicate the pinealocyte.The magnigication of figure A is ×200,figure B is ×4002.OB 医用生物胶粘贴法建立胃荷瘤小鼠原位移植瘤模型本研究建立胃荷瘤小鼠原位移植瘤模型，，旨在探讨不同浓度的褪黑素对其响变化。结果如图 2 所示，胃荷瘤小鼠胃组织切片 HE 染色中，胃组织细胞形符合肿瘤细胞形态，证实胃荷瘤小鼠原位移植瘤模型建立成功。

28图 3 MLT 干预两周胃荷瘤小鼠脾细胞中 CD4、CD8a、CD38、CD6perforin、Granzyme B、CD26、CD278、I-A/I-E 表达变化（“*”表示P<0.05）ig3 The experession of CD4、CD8a、CD38、CD69、perforin、GranzCD26、CD278、I-A/I-E in the spleen cells of tumor-bearing mouse aintervention of melatonin(*P<0.05)CBA 法检测褪黑素干预胃荷瘤小鼠后血浆中 Th1、Th27 细胞因子含量本研究采用 CBA 试剂盒检测了胃荷瘤小鼠血浆中 Th1、Th2、Th17 细量的变化，结果如图 4 所示，MLT 干预 2 周后，与对照组相比，10
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

【参考文献】

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本文编号：2677814