C6orf106在胰腺癌侵袭和增殖中的作用及相关机制研究

发布时间：2020-05-26 17:23

【摘要】：目的:胰腺癌是恶性度最高的消化道肿瘤之一,多数患者得到诊断时已经是进展期,预后极差。然而,胰腺癌恶性生物学行为的调控机制仍不明确,探索影响其发生、发展机制的关键靶点至关重要。C6orf106定位于人染色体6p21.31中。一些研究表明,C6orf106在肺癌和乳腺癌中都有高表达,且与多种肿瘤的侵袭和增殖行为密切相关。然而,其在胰腺癌细胞中的表达和定位尚未阐明,并且C6orf106是否作为致癌因子起作用尚未在胰腺癌中得到证实。在本研究中,我们探讨了C6orf106在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系中的表达及其与患者的临床病理学关系,更进一步研究了C6orf106在胰腺癌细胞增殖和侵袭中的作用及机制,该研究将为诊断和探索胰腺癌的治疗靶点提供新的方向。方法:本研究的伦理批准来自中国医科大学地方试验委员会,并已获得患者的知情同意。原发肿瘤标本取自2010年至2015年在中国医科大学附属第一医院诊断为胰腺癌并接受完全切除的91例患者。所有患者均未接受过术前放疗或化疗。(1)免疫组织化学(IHC)检测91例患者胰腺癌组织中C6orf106表达水平及定位,探讨其表达的临床病理学意义。(2)细胞培养:Panc1,Capan2,SW1990和Miapaca2胰腺癌细胞系按常规培养。(3)细胞转染:质粒转染和siRNA处理,上调或下调胰腺癌细胞中C6orf106的表达水平。(4)细胞生物学行为检测:Transwell法,MTT,克隆形成测定等检测胰腺癌细胞的侵袭及增殖能力。(5)Western blot检测C6orf106水平变化后其相关靶蛋白水平的变化。结果:1.C6orf106在胰腺癌标本和细胞系中的表达:C6orf106在胰腺癌旁组织的细胞质中弱表达,胰腺癌组织细胞质中高表达。C6orf106在胰腺癌旁组织中的表达率(17.1%,6/35)显着低于胰腺癌组织(44.0%,40/91 vs 17.1%,6/35,P0.001)。统计分析显示,C6orf106的表达与胰腺癌T分期(P=0.010),阳性区域淋巴结转移(P=0.012)和TNM分期(P=0.006)明显相关。在胰腺癌细胞系中,Western印迹结果显示C6orf106在Capan2细胞中高表达,在Panc1细胞中低表达,进而选择这两种细胞系用于进一步研究。2.过表达C6orf106可增强胰腺癌细胞的侵袭能力:在Panc1细胞中上调、在Capan2细胞中下调C6orf106表达水平,以探索其对胰腺癌细胞侵袭能力的影响。在过表达C6orf106后,Panc1细胞的侵袭能力明显增强;相应地,下调Capan2细胞中的C6orf106表达,其侵袭能力显着降低。在Panc1细胞中转染C6orf106质粒后,Snail被上调,E-cadherin被下调。在Capan2细胞中下调C6orf106表达后,其Snail的表达被下调,E-cadherin被上调。然而,其他蛋白质如Slug,Occludin,Zo-1和α-catenin对Panc1和Capan2细胞中C6orf106的过表达或减少的反应没有显示出显着变化。3.C6orf106促进胰腺癌细胞增殖能力:Panc1细胞中过表达C6orf106显着促进增殖及克隆形成能力,而在Capan2细胞中用siRNA下调C6orf106后其增殖及克隆形成能力也下降。相应的在C6orf106表达上调或下调后,Cyclin D1和Cyclin E1表达显着增加或减少,而其他细胞周期蛋白表达没有明显改变。4.C6orf106通过激活ERK-P90RSK促进肿瘤增殖和侵袭:我们发现在Panc1细胞中上调或Capan2细胞中下调C6orf106后,p-ERK及其下游蛋白p-P90RSK明显上调或下调,而其他关键信号通路蛋白如p-AKT,AKT,p-P38,P38,p-FAK以及FAK均未发现显着变化。在Panc1细胞中过表达C6orf106后,将ERK特异性抑制剂PD98059加入培养基中。结果表明,添加PD98059可以抵消Snail,Cyclin D1和Cyclin E1的增加以及E-cadherin的减少以及P90RSK的磷酸化。这表明ERK和P90RSK可能是Snail,Cyclin D1和Cyclin E1的上游蛋白。结论:1、C6orf106在胰腺癌组织中高表达,且与肿瘤T分期、淋巴结转移及TNM分期呈正相关。2、C6orf106可能通过激活ERK-P90RSK信号上调Snail,Cyclin D1,Cyclin E1表达和下调E-cadherin表达,从而促进胰腺癌细胞的侵袭和增殖能力。
【图文】：

图 1，C6orf106 在胰腺癌及癌旁组织的表达： C6orf106 在癌旁组织弱表达(a)； C6orf106 在癌组织细胞质中高表达(b)。3.1.2 C6orf106 蛋白表达与胰腺癌患者临床病理学参数的关系91 例胰腺导管腺癌患者，其中男 35 例，女 56 例；年龄 32-71 岁，平均年龄 5岁；肿瘤位于胰腺头部 63 例，胰腺体尾部 28 例。根据 AJCC（美国癌症联合委员会）2016 年 TNM 恶性肿瘤分类的第 8 版，使用苏木精 - 伊红染色切片评估组织学

中国医科大学博士学位论文3 结果 C6orf106 在不同胰腺癌细胞株中的表达1、1、为了研究 C6orf106 对胰腺癌发生发展中的作用，，我们在各种胰腺癌(Panc1，SW1990，Miapaca2 和 Capan-2)检测 C6orf106 的表达。 Western显示 C6orf106 在 Capan2 细胞中高表达，在 Panc1 细胞中低表达(图 2)。因选择这两种细胞系用于进一步研究。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9

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本文编号：2682173