吲哚胺2,3-双加氧酶与乳腺癌化疗疗效的相关性研究

发布时间：2020-05-27 00:28

【摘要】：目的:研究吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)在乳腺癌患者新辅助化疗前局部肿瘤组织中的表达以及外周血中的活性,寻找二者间的关系,同时结合患者临床病理资料进行分析,明确化疗前肿瘤组织中IDO表达及外周血中IDO活性与新辅助化疗疗效有无相关性,为临床预测化疗是否敏感提供一定信息。建立人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231及SKBR-3的紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药细胞系,检测各细胞系中IDO蛋白表达、IDO酶活性及IDO mRNA表达水平,探究乳腺癌细胞紫杉醇耐药后IDO在蛋白及基因水平的变化趋势,为恶性肿瘤化疗耐药后制定治疗方案提供新的依据。方法:1、收集2015年9月至2016年12月在天津医科大学肿瘤医院接受新辅助化疗的53例乳腺癌患者的局部肿瘤组织粗针穿刺标本和外周血标本。免疫组织化学染色法检测新辅助化疗前局部肿瘤组织中IDO蛋白表达情况;高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测化疗前外周血中色氨酸(tryptophan,Trp)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)浓度并用Kyn/Trp比值评估外周血中IDO活性。分析IDO表达及活性与新辅助化疗疗效的相关性。2、以PTX为诱导药物,采用间歇诱导法建立MCF-7/PTX、MDA-MB-231/PTX及SKBR-3/PTX耐药细胞系。采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测乳腺癌原始细胞及PTX耐药细胞对PTX的耐药性,计算各个细胞系的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)。3、采用Western blots、高效液相色谱法及RT-PCR技术检测乳腺癌原始细胞(MCF-7、MDA-MB-231及SKBR-3)和乳腺癌PTX耐药细胞(MCF-7/PTX、MDA-MB-231/PTX及SKBR-3/PTX)中IDO蛋白表达、IDO酶活性水平及IDO mRNA表达水平。结果:1、在53例乳腺癌患者中,有28例(52.83%)患者新辅助化疗前肿瘤组织中IDO呈高表达。新辅助化疗前肿瘤组织中IDO表达随着临床T分期(P=0.006)、N分期(P=0.020)、临床分期(P=0.045)的增高而增加,且ER阳性者IDO高表达(P=0.014)。2、53例乳腺癌患者新辅助化疗前外周血中IDO平均活性为0.044±0.015。新辅助化疗前外周血中IDO活性随着临床T分期(P=0.019)和N分期的增高而提高(P=0.047)。3、乳腺癌新辅助化疗前肿瘤组织中IDO高表达患者,其外周血中IDO活性较高(P=0.004)。并且新辅助化疗前肿瘤组织中IDO表达及外周血中IDO活性均与新辅助化疗临床疗效及病理完全缓解(pathologic complete response,pCR)有关(P0.05)。多因素分析显示新辅助化疗前外周血中IDO活性是影响pCR的唯一独立因素(P=0.032)。4、建立PTX耐药终浓度为500nM的MCF-7/PTX、200nM的MDA-MB-231/PTX及200nM的SKBR-3/PTX的耐药细胞系。CCK-8法检测细胞耐药性显示MCF-7、MDA-MB-231及SKBR-3三个细胞系的原始和PTX耐药细胞间的IC50具有统计学差异(P0.05)。5、Western blots检测示:对比乳腺癌原始细胞,在PTX耐药细胞系MCF-7/PTX、MDA-MB-231/PTX及SKBR-3/PTX中IDO蛋白表达均增强。6、高效液相色谱法分析显示:对比乳腺癌原始细胞,在PTX耐药细胞MCF-7/PTX,MDA-MB-231/PTX及SKBR-3/PTX中,IDO酶活性明显增高(P0.05),差异具有统计学意义。7、RT-PCR检测示:对比乳腺癌原始细胞,在PTX耐药细胞MCF-7/PTX,MDA-MB-231/PTX及SKBR-3/PTX中,IDO mRNA的表达水平均明显提高(P0.05),差异具有统计学意义。结论:1、乳腺癌患者新辅助化疗前外周血中IDO高活性伴随肿瘤组织中IDO高表达,外周血IDO活性可以提示肿瘤局部IDO的表达水平。同时新辅助化疗前肿瘤组织中IDO表达及外周血中IDO活性与肿瘤体积大小和淋巴结转移密切相关。2、乳腺癌患者新辅助化疗前肿瘤组织中IDO表达和外周血中IDO活性与新辅助化疗疗效相关,临床化疗效果不敏感患者及未到达pCR患者化疗前肿瘤组织中IDO高表达、外周血中IDO高活性,可以为临床预测化疗是否敏感提供一定信息。3、在对紫杉醇耐药的乳腺癌细胞中,IDO蛋白表达增强、IDO酶活性增高及IDO mRNA表达水平提高,明确乳腺癌化疗耐药细胞中的IDO变化趋势可以为恶性肿瘤化疗耐药后制定治疗方案提供新的依据。
【图文】：

5）进样量：20 μL。（2）标准溶液1）犬尿氨酸标准储备液：200μg/mL。2）色氨酸标准储备液：400μg/mL 色氨酸标准储备液，二者均放入冰箱备用。（3）样品的处理：将血清加入等体积的高氯酸溶液（体积分数 5%）中，离心混匀，室温放置 10min，10000rmp×2min 离心，取 20μL 上清液进样分析。（4）血清中犬尿氨酸及色氨酸浓度的计算犬尿氨酸及色氨酸浓度采用外标法测定峰面积进行定量分析，数据由 Anstar色谱工作站处理完成。外周血中 Kyn 的浓度（μmol/L）=血清中 Kyn 的峰面积/标准液中 Kyn 的峰面积×标准液中 Kyn 的浓度×2。外周血中 Trp 的浓度参照上式计算。（5）结果分析1）标准品和外周血样品的色谱分离图：Kyn 和 Trp 保留时间分别 8.65min 和16.55min 左右，二者分离良好。图 1-1a 和图 1-1b 分别是混合标准工作液和人外周血样品的色谱分离图。

色谱工作站处理完成。外周血中 Kyn 的浓度（μmol/L）=血清中 Kyn 的峰面积/标准液中 Kyn 的峰面积×标准液中 Kyn 的浓度×2。外周血中 Trp 的浓度参照上式计算。（5）结果分析1）标准品和外周血样品的色谱分离图：Kyn 和 Trp 保留时间分别 8.65min 和16.55min 左右，二者分离良好。图 1-1a 和图 1-1b 分别是混合标准工作液和人外周血样品的色谱分离图。图 1-1a 混合标准工作液中 Kyn 和 Trp 分离曲线
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

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本文编号：2682642