HClO干预和GPx1-SiRNA转染对MCF-7细胞的影响作用

发布时间：2020-05-31 03:38

【摘要】：目的:研究HClO对乳腺癌MCF-7细胞体外生长的影响;探究GPx1-Si RNA对MCF-7细胞生存的影响。方法:用不同浓度的HClO干预乳腺癌MCF-7细胞,通过MTT法检测HClO对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;采用吉姆萨染色法观察HClO对乳腺癌MCF-7细胞造成的形态学变化和凋亡情况;流式细胞术检测HClO对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响;活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧水平;PI/RNase检测HClO对乳腺癌MCF-7细胞周期的影响。特异性针对谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)基因的GPx1-Si RNA转入MCF-7细胞中,采用荧光定量PCR技术检测GPx1 m RNA的表达水平;Western blot检测GPx1的表达量;DCFH-DA检测细胞内ROS水平的变化;Annexin V-FITC/7-AAD检测干扰GPx1基因后乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,减弱GPx1基因的表达水平后,添加不同浓度的类活性氧HClO,检测其凋亡率。结果:1.MTT法检测显示HClO对乳腺癌MCF-7细胞的增殖有抑制作用,且抑制作用随着处理药物浓度的增加而增强;2.HClO处理MCF-7后,采用吉姆萨染色法,通过倒置显微镜可以观察到凋亡细胞的形态,如:细胞皱缩、细胞核边缘化等,随着HClO浓度增加凋亡细胞数也随之增加;3.流式细胞仪检测结果显示,随着HClO浓度的增加MCF-7细胞的凋亡率逐渐增高,不同浓度HClO作用于MCF-7细胞10min后继续培养12h,其结果显示HClO呈浓度依赖性地诱导MCF-7细胞的凋亡;4.活性氧检测结果,HClO能够引起MCF-7细胞内活性氧水平的升高,且MCF-7细胞内活性氧的水平随着HClO浓度的增加而增加;5.细胞周期检测结果显示,HClO浓度高于100μM时,细胞周期明显被抑制;6.GPx1-Si RNA转入乳腺癌MCF-7细胞,GPx1 m RNA的表达水平明显下调,GPx1的蛋白表达量有明显的下降(P0.05);7.GPx1-Si RNA对MCF-7细胞内ROS水平没有明显的影响,GPx1-Si RNA+(HClO)组促增细胞内ROS水平强度明显高于HClO干预组;8.与正常对照组及阴性对照组相比GPx1-Si RNA组的凋亡率无明显的变化;9.GPx1-Si RNA+(HClO)组促凋亡率高于HClO干预组。结论:HClO处理MCF-7细胞后,MCF-7细胞的增殖被抑制,且存活率与药物浓度成反比关系;HClO作用于MCF-7细胞,主要以诱导细胞凋亡为主。GPx1-Si RNA特异性干扰GPx1后,MCF-7细胞内GPx1的m RNA表达量明显下调。GPx1表达量下调,对MCF-7细胞的活性影响甚微,但可以增强MCF-7细胞对活性氧的敏感性。
【图文】：

图 1 不同浓度 HClO 对 MCF-7 细胞增殖率的影响（*P<0.05）表 1 不同浓度 HClO 对 MCF-7 细胞增殖率的影响（x±s，n=3）HClO 浓度（μM） 细胞增值率（%） P对照组 100±5.550.0050 96.09±6.84100 86.58±6.14*200 79.04±8.71*400 56.33±7.03*800 29.04±6.55**与对照组相比，P<0.05。吉姆萨染色观察 HClO 处理 MCF-7 细胞前后细胞形态学的变情况

第 2 章 次氯酸对乳腺癌 MCF-7 细胞的杀伤机制研究学的变化逐渐变得较显著，尤其在 400μM、800μM 时出现了细胞膜完整性的丧失、胞核碎裂、细胞器变形等坏死现象。
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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本文编号：2689221