突变型FGFR2Ⅲc胞外段（msFGFR2c）与EGFR的相互作用研究
发布时间：2020-05-31 11:45
【摘要】：目的:在众多癌症中往往存在着多种受体酪氨酸激酶通路的异常激活,各通路之间存在着冗余机制,即其中一个信号通路被抑制时会导致另一个或者多个通路的信号激活,因而单一靶点药物治疗肿瘤效果不佳。前期研究表明本实验室制备的msFGFR2c能有效的抑制FGFR信号通路,在EGF诱导的情况下,msFGFR2c能同时抑制EGFR的磷酸化,但其具体机制还不清楚,故探索其作用机制为开发双靶点或多靶点药物具有重要意义。方法:运用原核生物表达系统构建表达EGFR胞外段重组蛋白,CCK-8法检测其生物活性;WB检测msFGFR2c对DU145中EGFR磷酸化的抑制作用;Co-IP检测msFGFR2c与EGFR的相互作用;激光共聚焦检测msFGFR2c与EGFR的共定位情况;ITC检测msFGFR2c与EGFR的结合力。结果:CCK-8检测结果显示,重组表达的EGFR胞外段蛋白能抑制EGF对H1299诱导的增殖作用。WB结果显示msFGFR2c能明显抑制DU145细胞中EGFR的磷酸化作用。Co-IP结果显示msFGFR2c能够与EGFR相互结合。激光共聚焦结果显示msFGFR2c与膜上过表达的EGFR存在明显的共定位情况。ITC结果显示msFGFR2c与EGFR有直接相互作用,K=5.41E4M~(-1)。结论:本课题组构建表达的突变型FGFR2Ⅲc胞外段蛋白msFGFR2c,有望成为靶向(FGFR和EGFR)的双靶点抗肿瘤药物。
【图文】：
从而使得 CR1 结构域突出蛋白表面，有利于与另一个受体的 CR1 结构域互接触形成二聚化，进而传递信息[40]。CR1 和 CR2 结构域第一个模块中含有的保守色酸残基（Trp176 和 Trp 492）插入 L 结构域中 β-螺旋的第 4 和第 5 螺旋之间，，与其他保色氨酸残基形成疏水的环境（Trp 140 和 Trp 453），然而由 1-476 位残基组成的 EGFR 构体由于缺乏这种色氨酸残基的相互作用，其与配体的亲和力不足全部胞外段的一半，CR结构域中的部分残基通过靶向细胞膜上的小窝/筏，能有效的增强与配体的结合能力[41]。Elleman TC 等的研究发现一种截短的可溶性的 EGFR 胞外段蛋白，其包含残基 1-50（sEGFR501），包括 EGFR 胞外段的结构域 I、II、III 以及部分结构域 IV 氨基酸残基，全长 EGFR 胞外域相比其结合人 EGF 或 TGFβ1 的亲和力高 13-14 倍，并且当经过 EGF 导后能够形成 2：2 二聚体[40]。 Zhou M 等发现的 sEGFR621 可作为表皮生长因子抑制剂具有一定的干扰配体诱导受体形成二聚化合物的能力[42]。胞外段如图 1 所示。据此，因实验室在原核系统表达蛋白方面经验比较丰富，故采用原核生物表达系统进行纯化表达EGFR 胞外段，以获得有生物活性的 EGFR 胞外段，用于后续实验研究。
暨南大学硕士学位论文要作用。由表皮生长因子（EGF）和神经调节蛋白等组成的生长因子通过激活由ER2-4 组成的 EGF 受体（EGFR）家族成员来刺激细胞分裂。这种高度保守的块在各种生物体的形态发生中起着至关重要的作用，无论是低等生物还是高等还涉及人类诸多类型肿瘤细胞的生长和发育[45]。表皮生长因子（Epidermal growth factor，EGF）是一类由 53 个氨基酸组成保守的能和结构相关的多肽[46]。在人类中，多达 30 多种配体和 EGFR 家族受体位于信号转导网络的起始。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R73
本文编号：2689806
【图文】：
从而使得 CR1 结构域突出蛋白表面，有利于与另一个受体的 CR1 结构域互接触形成二聚化，进而传递信息[40]。CR1 和 CR2 结构域第一个模块中含有的保守色酸残基（Trp176 和 Trp 492）插入 L 结构域中 β-螺旋的第 4 和第 5 螺旋之间，，与其他保色氨酸残基形成疏水的环境（Trp 140 和 Trp 453），然而由 1-476 位残基组成的 EGFR 构体由于缺乏这种色氨酸残基的相互作用，其与配体的亲和力不足全部胞外段的一半，CR结构域中的部分残基通过靶向细胞膜上的小窝/筏，能有效的增强与配体的结合能力[41]。Elleman TC 等的研究发现一种截短的可溶性的 EGFR 胞外段蛋白，其包含残基 1-50（sEGFR501），包括 EGFR 胞外段的结构域 I、II、III 以及部分结构域 IV 氨基酸残基，全长 EGFR 胞外域相比其结合人 EGF 或 TGFβ1 的亲和力高 13-14 倍，并且当经过 EGF 导后能够形成 2：2 二聚体[40]。 Zhou M 等发现的 sEGFR621 可作为表皮生长因子抑制剂具有一定的干扰配体诱导受体形成二聚化合物的能力[42]。胞外段如图 1 所示。据此，因实验室在原核系统表达蛋白方面经验比较丰富，故采用原核生物表达系统进行纯化表达EGFR 胞外段，以获得有生物活性的 EGFR 胞外段，用于后续实验研究。
暨南大学硕士学位论文要作用。由表皮生长因子（EGF）和神经调节蛋白等组成的生长因子通过激活由ER2-4 组成的 EGF 受体（EGFR）家族成员来刺激细胞分裂。这种高度保守的块在各种生物体的形态发生中起着至关重要的作用，无论是低等生物还是高等还涉及人类诸多类型肿瘤细胞的生长和发育[45]。表皮生长因子（Epidermal growth factor，EGF）是一类由 53 个氨基酸组成保守的能和结构相关的多肽[46]。在人类中，多达 30 多种配体和 EGFR 家族受体位于信号转导网络的起始。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R73
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1 刘传;突变型FGFR2Ⅲc胞外段（msFGFR2c）与EGFR的相互作用研究[D];暨南大学;2018年
本文编号：2689806
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