鞭毛素蛋白联合雷帕霉素对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤作用及机制初探

发布时间：2020-06-02 04:46

【摘要】：目的:在乳腺癌荷瘤小鼠模型中,初步探讨鞭毛素蛋白(Flagellin,FliC)与雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)联用对肿瘤生长和转移的影响及作用机制。方法:体内实验中,用小鼠乳腺癌4T1细胞建立BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤模型,并将小鼠分为四组,分别是Control组、FliC组、RAPA组和RAPA+FliC组;分别注射鞭毛素蛋白和(或)雷帕霉素,并定期记录小鼠肿瘤大小、体重变化及生存情况,计算肿瘤抑制率和生存率。体外实验中,用MTT法检测鞭毛素蛋白和雷帕霉素联用对4T1细胞的直接抑制作用。从体内实验中得到的肿瘤组织内提取肿瘤组织细胞并用流式细胞术进行检测,分别检测CD4~+CD25~+T调节细胞(Treg)、CD11b~+Gr-1~+的骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)和CD11b~+F4/80~+的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)细胞的比例;免疫组化检测CD8~+T细胞浸润情况并用Image Pro Plus6.0计算阳性率;HE染色检测肝、肺组织肿瘤转移情况。结果:体内实验中,RAPA+FliC组的平均体重最轻,约为16.54g;RAPA和FliC对小鼠肿瘤生长均有抑制作用,但RAPA+FliC组抑制效果最好,肿瘤生长抑制率约为79.60%±5.561;与Control组相比,其余三组生存率均较低。在体外实验中,给药组对4T1细胞增殖的抑制率均高于Control组,但RAPA+FliC组的抑制率最高,约为42.20%。肿瘤组织中,RAPA+FliC组组织细胞中CD4~+CD25~+Treg细胞的比例高于其余组别,约为27.36%,Control组最低,约为7.38%,而RAPA+FliC组和RAPA组组织细胞中CD11b~+Gr-1~+MDSC和CD11b~+F4/80~+TAM比例基本相同且均为最低,分别约为6.28%和6.58%以及5.07%和4.88%,FliC组最高,约为27.03%和20.17%;CD8~+T细胞浸润情况为Control组最少,其余三组均高于Control组,其中FliC组最多;与Control组相比,RAPA组和RAPA+FliC组肝、肺组织肿瘤转移情况较轻,但FliC组更为严重。结论:鞭毛素蛋白与雷帕霉素联合作用可增强乳腺癌荷瘤小鼠抗肿瘤效应,抑制肿瘤生长和转移。其机制可能主要在于增强了机体免疫系统及肿瘤微环境中免疫细胞对肿瘤的杀伤作用,而不仅仅是对肿瘤细胞的直接抑制作用。
【图文】：

注：图 1 中虚线部分表示第一次给药时间，即建模后第 5 天开始测量肿瘤大小，第八天开始鞭毛素蛋白和雷帕霉素注射，随后即测量体重和试剂注射隔日进行图 1 各组体重变化趋势Fig.1 The variation tendency of mice weight2.2 各组小鼠肿瘤生长情况如图 2 所示，用游标卡尺测量肿瘤大小，并监测肿瘤大小变化。与 Control 组相比，FliC 组、RAPA 组和 RAPA+FliC 组对肿瘤生长均有抑制作用，其中RAPA+FliC 组对肿瘤的抑制作用高于另外两组。如图 3 所示，在处死小鼠后取下肿瘤称重并比较肿瘤大小，得到结果与游标卡尺测量结果趋势完全一致。用Graphpad 软件根据所得数据计算肿瘤抑制率，结果如图 4，与 Control 组（肿瘤大小平均 1451.235mm3，肿瘤重量平均 1.49g）相比，FliC 组（肿瘤大小平均970.95mm3，肿瘤重量平均 0.765g）的肿瘤抑制率为 48.66% ± 1.678，RAPA 组（肿瘤大小平均 799.15mm3，肿瘤重量平均 0.543g）的肿瘤抑制率为 54.36% ± 5.494，，

注：图 2 中虚线部分表示第一次给药时间，即建模后第 5 天开始测量肿瘤大小，第八天开始鞭毛素蛋白和雷帕霉素注射，随后即测量大小和试剂注射隔日进行图 2 各组肿瘤大小变化趋势Fig.2 The variation tendency of tumor size
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R730.51

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本文编号：2692626