外泌体hsa-miR-766-3p、hsa-miR-4787-3p与食管鳞癌患者预后的关联性研究

发布时间：2020-06-04 22:15

【摘要】：目的:分析外泌体miR-766-3p、miR-4787-3p与食管鳞癌患者淋巴结转移的相关性;通过细胞功能实验探索miR-766-3p、miR-4787-3p对食管鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响;分析miR-766-3p、miR-4787-3p与食管鳞癌患者预后的关联性,评价上述候选microRNAs在预测食管鳞癌患者淋巴结转移、判断患者预后的临床应用价值。方法:1.收集福建省肿瘤医院的食管鳞癌患者血浆标本,采用实时荧光定量PCR技术检测食管鳞癌患者血浆外泌体及其细胞中候选microRNAs的表达水平;运用Mann-Whitney U检验分析组织、外泌体候选microRNAs表达水平与食管鳞癌患者临床特征(淋巴结是否转移、淋巴结转移个数、TNM分期、浸润程度等)关联性;利用Logistic回归,构建预测术后复发转移的模型,使用Delong et al法比较模型间的ROC曲线下面积差异性。2.通过构建并转染上述候选microRNAs的进入人食管鳞癌细胞系,应用荧光标记法观察细胞转染效率,CCK-8实验检测细胞的增殖能力,细胞划痕、Transwell小室迁移侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力。3.使用Kaplan-Meier法绘制食管鳞癌患者的生存曲线,Log-rank法比较生存率的差异;COX回归模型分析组织和血浆外泌体miR-766-3p、miR-4787-3p对食管鳞癌患者预后的影响。结果:1.淋巴结转移患者与未转移比较,miR-766-3p(P=0.007)与miR-4787-3p(P=0.003)的差异表达具有统计学意义。预测模型1的曲线下面积为0.813(95%CI:0.695-0.931);模型2的曲线下面积为0.889(95%CI:0.776-1.00);候选microRNAs增加预测术后转移的曲线下面积(P=0.037)。2.CCK-8发现miR-766-3p/miR-4787-3p过表达均能增强细胞增殖能力,随着表达水平升高,细胞增殖能力越强(P0.05);细胞划痕、transwell小室迁移侵袭实验表明,过表达miR-766-3p、miR-4787-3p相比于对照组,细胞迁移侵袭能力较强,且不同表达水平组迁移侵袭能力差异具有统计学意义(P0.05)。3.调整人口学、临床病理特征因素后,外泌体(HR=3.197,95%CI:1.033-9.893,P=0.044)、组织(HR=3.126,95%CI:1.182-8.266,P=0.022)miR-766-3p高表达是食管鳞癌患者不良预后的高危因素。结论:过表达miR-766-3p、miR-4787-3p增强食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;血浆外泌体高表达miR-766-3p、miR-4787-3p可诱导食管鳞癌患者发生淋巴结转移,包含miR-766-3p、miR-4787-3p的模型可提高食管鳞癌术后转移的预测效果;外泌体、组织高表达miR-766-3p是患者不良预后的高危因素。
【图文】：

淋巴结转移,表达水平,食管鳞癌

较利用 Mann-Whitney U 检验分析 miR-766-3p、miR-4787-3p 表达水平与食癌淋巴结转移的相关性。分析结果表明，，食管鳞癌淋巴结转移组相比于淋巴结转移组，血浆外泌体 miR-766-3p（P=0.007）、miR-4787-3p（P=0.003）表达存在差异性，且差异具有统计学意义。（表 1.6 与图 1.2）表 1.6 外泌体 miRNAs 在食管鳞癌淋巴结转移与未转移患者中的比较miRNAs食管鳞癌淋巴结转移组（n=43）食管鳞癌淋巴结未转移组（n=36） Z M（P25，P75） M（P25，P75）miR-766-3p 2.702（0.813,6.071） 0.921（0.404,3.169） 2.717 miR-4787-3p 2.655（0.449,9.251） 0.742（0.203,2.709） 2.924

ROC曲线,淋巴结转移,ROC曲线,血浆

95％ CI:0.576-0.808；截断点确认为 0.478，灵敏度 0.651，特异度 0.722，约登指数 0.373（图 1.3）。将 ROC 曲线得出的临床诊断截断点，分别对 79 例样本中进行联合筛检试验，（结果如表 1.7）。采用串联的筛查方法，特异度度有所提高；采用并联的方法，灵敏度得到提高。通过 ROC 曲线确定食管鳞癌患者淋巴结转移的 miR-766-3p、miR-4787-3p 临床诊断截断点有一定的参考价值。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.1

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